【摘 要】
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Jan Zarzycki在前入的基础上完善了橙色绿屈挠菌类的三羟基丙酸循环。在三羟基丙酸固碳途径的开始,两分子乙酰辅酶A羧化生成丙二酰辅酶A。然后被还原去辅酶A生成三羟基丙酸;在
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Jan Zarzycki在前入的基础上完善了橙色绿屈挠菌类的三羟基丙酸循环。在三羟基丙酸固碳途径的开始,两分子乙酰辅酶A羧化生成丙二酰辅酶A。然后被还原去辅酶A生成三羟基丙酸;在辅酶A合酶的作用下合成丙酰辅酶A。然后,丙酰辅酶A一分子进入第一循环,一分子进入第二循环。在第二个循环中,丙酰辅酶A在三功能裂解酶的作用下合成β-甲基苹果酰辅酶A,随后在脱水酶的催化下生成中康酰-C1-辅酶A。在中康酰-C4-辅酶A水合酶参与下,中康酰-C4-辅酶A与水合成(S)-柠苹酰辅酶A。最终被MMC裂解酶这个三功能裂解酶催化裂解为丙酮酸和乙酰辅酶A。到此,第二循环结束。而中康酰-C1-辅酶A是不能被中康酰-C4-辅酶A水合酶催化水合为(S)-柠苹酰辅酶A。因此,我们推断:有一种分子内辅酶A转移酶,在该酶作用下,中康酰-C1-辅酶A转化为中康酰-C4-辅酶A(mesaconyl-CoA C1-C4 CoA transferase,以下简称MCT)。为研究这个分子内的辅酶A转移酶,本人将合成MCT这个酶的基因克隆到大肠杆菌原核表达载体上,表达纯化得到大量的MCT蛋白,并且用于蛋白晶体的试验。通过一系列的结晶优化,得到了用于X-晶体衍射的晶体。
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