共轭亚油酸(conjugated linoleic acids,CLA)是一种天然脂肪酸,具有许多种对人体有益的功能,有抗氧化、抗癌、降低胆固醇等作用。亚油酸异构酶可将CLA转化成具有生物活性的CLA。目前,亚油酸异构酶的相关研究已成为热点。但在一直没有市售的用来检测亚油酸异构酶的抗体,为亚油酸异构酶的检测和进一步研究带来了困难。所以,特异性强、活力高的检测亚油酸异构酶的抗体的研发显得尤为重要。本实验首先运用在线生物学软件对植物乳杆菌(Lactobacillis plantarum subsp. plantarum P8)的亚油酸异构酶结构域和氨基酸序列进行亲水区分析,发现该蛋白N端含有较多亲水性氨基酸,然后再以该段多肽序列为基础构建原核表达载体。针对亚油酸异构酶的N端结构域123个氨基酸残基多肽片段设计一对特异性引物,以植物乳杆菌P8的基因组为模板,PCR扩增该结构域片段基因,插入至(?)pEASY-E1原核表达载体上,转化至(?)E.coli BL21中,IPTG低温诱导表达重组蛋白,该重组蛋白经Ni2+-NTA agarose分离和纯化,免疫兔子制备亚油酸异构酶抗体。通过菌落PCR和序列分析鉴定,表明获得了亚油酸异构酶多肽片段基因的克隆,用SDS-PAGE与Western-blot检测表明,融合蛋白成功表达并得以纯化。用双向免疫扩散法证明通过基因工程手段获得的亚油酸异构酶N端多肽免疫动物可获得了1：128高效价抗体。该结果为进一步检测亚油酸异构酶、大力开发应用亚油酸异构酶生产CLA奠定基础。