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背景多囊卵巢综合征(polycystic ovarian syndrome,PCOS)是一种常见的内分泌疾病,其特点是慢性不排卵、雄激素水平过高和卵巢多囊样改变,还可能伴有高胰岛素血症、胰岛素抵抗、早期2型糖尿病、血脂紊乱、心血管疾病和不孕。PCOS的病理性改变包括促性腺激素释放激素(gonadotropin-releasing hormone,Gn RH)的分泌脉冲频率增加、性腺和肾上腺来源的非甾体激素水平升高、月经不调、高胰岛素血症等。GPR54(G蛋白偶联受体54,其编码基因为KISS-1R)是视紫红质家族成员,2003年de Roux和Seminara同时发现了该膜蛋白对下丘脑-垂体-性腺轴起到关键的调控作用。Kisspeptin是GPR54的配体之一,由KISS-1基因编码合成。该神经肽在下丘脑与GPR54结合后作为重要信号引发Gn RH峰,被认为是哺乳动物中引起促性腺激素分泌的最有效刺激物。Young等发现PCOS患者kisspeptin的血液基础水平高于正常女性,由此推测kisspeptin可能参与PCOS的病理过程。S.A.Yilmaz等还发现kisspeptin基础水平与血清总睾酮、黄体生成素(luteinizing hormone,LH)、游离雄激素指数和改良Ferriman-Gallwey(m FG)评分分数呈显著性正相关。以往关于kisspeptin的研究多集中在中枢水平上参与PCOS的病理过程,在性腺水平上的研究还较少。本实验比较了PCOS患者和正常女性卵泡微环境中kisspeptin表达水平的差异,同时研究了kisspeptin对卵巢颗粒细胞激素分泌功能及相关基因的影响,推测该多肽可能通过自分泌和旁分泌方式参与PCOS患者卵巢微环境病理改变过程。目的1.比较PCOS患者和正常女性卵泡液中kisspeptin的蛋白水平以及KISS-1和KISS-1R在颗粒细胞的表达丰度,初步探讨PCOS患者kisspeptin在蛋白和基因水平上发生的改变。2.探索kisspeptin及其受体拮抗剂p234分别对颗粒细胞系和黄素化颗粒细胞分泌激素的影响以及对相关内分泌和代谢基因的影响。方法1.ELISA法检测正常女性和PCOS患者取卵当天卵泡液中kisspeptin的水平。2.RT-PCR检测正常女性和PCOS患者卵泡液中分离出的颗粒细胞中KISS-1和KISS-1R m RNA的表达。3.CCK-8法检测不同浓度kisspeptin处理后颗粒细胞的生长状态。4.ELISA检测kisspeptin处理后对颗粒细胞分泌雌激素和孕激素的影响。5.RT-PCR检测kisspeptin和p234处理后颗粒细胞内分泌和代谢相关基因表达水平的变化。6.免疫荧光染色技术检测GPR54蛋白在颗粒细胞上的表达。结果1.PCOS患者取卵日卵泡液kisspeptin水平显著高于正常女性,差异有统计学意义。2.与体重正常的女性相比,PCOS患者颗粒细胞KISS-1 m RNA水平较高,差异有统计学意义;KISS1R m RNA在PCOS组有升高趋势,但无显著性差异。3.正常女性中颗粒细胞KISS-1基因的表达水平与身体质量指数(BMI)正相关(r=0.743,P<0.01),PCOS患者KISS-1 m RNA的表达与BMI无相关性。4.不同水平的kisspeptin对颗粒细胞系的生长影响不同:高浓度的kisspeptin抑制细胞增殖,低浓度的kisspeptin促进细胞增殖。5.Kisspeptin处理颗粒细胞系后,颗粒细胞雌激素和孕激素的分泌无明显改变;kisspeptin处理黄素化的颗粒细胞后,颗粒细胞分泌雌激素和孕激素增加。6.Kisspeptin分别以600ng/ml和1600ng/ml的刺激浓度处理颗粒细胞后,St AR m RNA、KISS-1R、β-HSD、LDLR、Adponectin m RNA在处理组和对照组均无显著差异。拮抗剂p234以1600ng/ml的刺激浓度处理颗粒细胞后,St AR、β-HSD、P450scc、P450arom和LHCG m RNA的表达和无刺激物对照组相比均有下降趋势,但差异不显著(P>0.05),Adipo-R m RNA的表达升高,且差异有显著性(P<0.05),Adponectin、和FSHR m RNA的表达有升高趋势,但差异不显著(P>0.05)。7.Kisspeptin的受体蛋白GPR54在颗粒细胞上表达,定位于细胞膜上。结论Kisspeptin可能同时通过生殖内分泌和能量代谢两种机制参与PCOS患者的卵巢微环境的病理改变过程。