大鼠慢性局灶性脑低灌注模型建立及神经细胞凋亡的动态观测

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目的:本课题利用改良大鼠线栓法致MCAO建立慢性局灶性脑低灌注模型,研究慢性局灶性低灌注条件下神经细胞形态学的改变及血清hs-CRP的变化,为研究脑血管疾病及神经退行性疾病提供基础实验依据。方法:1、成年健康SD雄性大鼠60只,随机平均分为正常对照组、假手术组及造模后后1 d、3 d、7 d、14 d共6组,通过改良线栓法MCAO模型。应用神经行为学评分、TTC染色观察脑片及光镜、透射电镜观察细胞形态学的改变。2、采用实验一所用大鼠。应用免疫组化及ELISA方法,观察rCCH大鼠不同时间点脑组织神经细胞凋亡的表达及血清中hs-CRP的含量。结果:1、各组大鼠术后两种神经行为学评分均≤1分,各组相互比较差异无统计学意义(P>0.05);对照组与实验组大鼠脑切片TTC染色均未见局灶性脑梗灶。电镜可见神经细胞胞浆内细胞器崩解。2、血清hs-CRP含量和神经细胞凋亡检测:术后1 d、3 d、7 d时,rCCH模型大鼠血清中hs-CRP含量与正常对照组比较,差异无显著性(P>0.05),术后14 d时,rCCH模型大鼠血清中hs-CRP含量高于正常对照组,差异有显著性(P<0.05);但hs-CRP数值在随日期递增,由此说明,在术后1-2 w时,随着实验时间的延长,rCCH模型大鼠血清中hs-CRP含量会继续增加。TUNEL法神经细胞凋亡染色显示,术后1 d内神经细胞凋亡细胞急剧增多,以星型胶质细胞为著,1 d组、3 d组及对照组间相比(P<0.01);7 d到14 d间凋亡细胞依然呈增多趋势,但是由于时间的间隔,增加的数目相对减少。结论:1、通过改良大鼠线栓致MCAO模型,可成功建立较稳定的大鼠慢性局灶性低灌注模型。2、慢性局灶性脑低灌注可导致供血区神经细胞过度凋亡,但未见片状炎性坏死。3、rCCH大鼠MCA供血区神经细胞凋亡随术后时间的延长而逐渐加重。
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