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目的:醒脑静注射液(XNJ)是在著名中医古方“安宫牛黄丸的”成分基础上改制而成的静脉注射药剂。主要成分为麝香、冰片、桅子、郁金等,具有醒脑开窍、化痰祛瘀、清热解毒的功效。主要以中风等各种脑病为适应症。临床观察证实了醒脑静注射液治疗中风病具有较好疗效,动物实验表明,醒脑静注射液对脑缺血—再灌注损伤有一定保护作用。本研究旨在探讨醒脑静在脑缺血再灌注( Ischemia Reperfusion,I/R)过程中的疗效及机制。 方法:本研究主要通过 MRI探讨醒脑静对 I/R的治疗效果,用Western Blot检测自噬相关蛋白和抗凋亡蛋白的表达,并探讨XNJ可能的作用途径。具体实验步骤简略如下:(1)栓线法制备120只体重在280~300g的模型,按Zealonga原则评分后,选取评分为2分的的MCAO模型后随机分为2大组:MRI组和WB组。(2)MRI组随机分为3小组:空白对照组3只,模型对照组7只,醒脑静组10只;WB组随机分为10组:模型组,溶媒组,醒脑静0.5ml组,醒脑静1.0ml组,醒脑静1.5ml组,醒脑静2.0ml组,3-MA组,3-MA+醒脑静组,雷帕霉素(Rapa)组,Rapa+醒脑静组。其中MRI组通过影像学探讨醒脑静对I/R的治疗效果;醒脑静0.5ml组,醒脑静1.0ml组,醒脑静1.5ml组,醒脑静2.0ml组等四组研究醒脑静治疗 I/R的效果与醒脑静使用剂量之间的关系;模型组,醒脑静2.0ml组,3-MA组,3-MA+醒脑静组,雷帕霉素(Rapa)组,Rapa+醒脑静组等六组间,通过阳性对照组和阴性对照组,研究 XNJ可能的作用方式和途径。(3)每只模型按要求均予腹腔给药:空白组仅作颈部血管分离处理;模型组作MOCA模型处理;以下各组均在MOCA模型的基础上,注射相应的药物。溶媒组经腹腔折射3ml双蒸水;醒脑静0.5ml组,醒脑静1.0ml组,醒脑静1.5ml组,醒脑静2.0ml组分别腹腔注射0.5、1.0、1.5、2.0ml的XNJ;3-MA按1mg/只的标准腹腔注射3-MA;3-MA+醒脑静组在3-MA基础上,腹腔注射2.0ml的XNJ,Rapa组按1mg/只标准,腹腔注射1mgRapa;Rapa+XNJ组在Rapa组的基础上,腹腔注射2.0mlXNJ。(4)造模成功24h后,MRI组模型检测用药前后模型脑梗体积的变化;WB组先提取脑组织蛋白,然后用WB检测组织内自噬相关蛋白的表达量。 结果:(1)在MRI部分,各组大鼠给药24小时后的脑梗体积均大于给药前的脑梗体积,差异具有统计学意义(P<0.05);(2)MRI显示,醒脑静组的脑梗体积变化量小于模型组,差异具有统计学意义(P<0.05);(3)与模型组相比,醒脑静组的Beclin1和LC3的表达量均降低, Bcl-2的表达量升高,其差异具有统计学意义(P<0.05);(4)Bcl-2蛋白在醒脑静高剂量组中的表达量高于低剂量组,Beclin1和LC3在高剂量组的表达量低于低剂量组,其差异具有统计学意义(P<0.05);(5) Bcl-2与Beclin1之间的表达量之间的相关系数 r=-0.91,对 r进行 t检验,(P<0.05);(6)醒脑静+3-MA组中Beclin1和LC3的表达量低于其他两组,Bcl-2的表达量则高于其它两组,其差异具有统计学意义(P<0.05);(7)醒脑静+雷帕组Beclin1和LC3的表达量大于醒脑静组、小于雷帕组,Bcl-2的表达量则小于醒脑静组、大于雷帕组,其差异具有统计学意义(P<0.05)。 结论:(1)醒脑静可抑制脑缺血再灌注过程中的自噬反应;(2)醒脑静对自噬的抑制作用与醒脑静的使用剂量呈正相关性;(3)Bcl-2与Beclin1之间的表达量呈负相关性;(4)醒脑静能够协同3-MA的抑制自噬作用,拮抗Rapa的促自噬作用;(5)XNJ通过影响Bcl-2/Beclin1之间相互作用的方式抑制I/R过程中的自噬反应。