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背景卒中后抑郁（post-stroke depression,PSD）是脑卒中后常见的并发症之一,以兴趣减退、睡眠障碍、思维迟钝、情绪低落甚至绝望为主的念头和行为等的情感障碍为主要表现。慢性束缚应激（Chronic restraint stress,CRS）行为限制模拟临床上脑卒中患者偏瘫后行为受限,逐渐引起情绪低落、情绪障碍等抑郁、焦虑样等表现,并下调皮层和海马的神经突触可塑性。大鼠脑缺血损伤后,p38 MAPK信号通路的活化调控,参与了大脑神经系统缺氧缺血应答、炎症的反应等过程,并且影响了大脑功能、形态的损伤后修复,可能是PSD发生发展的分子机制之一。目的1.通过CRS联合MCAO手术,建立PSD大鼠模型,观察大鼠抑郁样行为及学习记忆情况;2.探讨p38 MAPK信号通路在PSD大鼠抑郁样行为过程中的作用。方法1.PSD动物模型大鼠的构建:选取6w周龄,体重在200-220g之间SPF级雄性SD大鼠,随后随机分层分为健康对照（Ctrl）组,卒中（MCAO）组,卒中后抑郁（PSD,MCAO+CRS）组和慢性束缚应激（CRS）组;其中MCAO和PSD组SD大鼠两组均采用左侧大脑中动脉栓塞术（middle cerebral artery occlusion model,MCAO）法构建SD大鼠大脑中动脉缺血损伤后再灌注动物模型,选用Longa评分方法评估MCAO术后大鼠神经功能损伤情况,分数在≥1分且＜4分,即评估1-3分的SD大鼠筛选入组;Ctrl组不进行线栓插入,不做任何手术处理;PSD组大鼠在MCAO术后恢复1周后给予CRS干预;CRS组和PSD组慢性束缚应激强度和时间均保持一致。选用体重测量实验、蔗糖水偏好指数实验（sucrose preference test,SPT）、旷场实验（open-field test,OFT）、强迫游泳实验（Forced Swimming Test,FST）、Y迷宫实验（Y-maze）等行为学指标评估大鼠一般身体状态变化情况、生命体征变化、快感行为缺失变化、绝望状态、焦虑抑郁样行为、探索运动能力和学习记忆能力等。PSD组大鼠构建成功之后,进行基因检测、蛋白表达以及形态学等后续实验行为。2.蛋白免疫印迹法（Western blot）法检测各组模型SD大鼠大脑左海马区、左皮质区、左前额区MKK3、MKK6、p38 MAPK、phospho-p38 MAPK和Bax、Bcl-2以及突触蛋白SYP、PSD95等的蛋白表达的水平变化情况。3.尼氏染色法、TUNEL染色法对比各组大鼠皮质及海马（CA1,CA3,DG）区神经元的形态结构变化、损伤程度及细胞凋亡情况。结果1.行为学测量结果:正常适应1周后,各组SD大鼠之间各项行为学基线测量指标相比无统计学差异（P＞0.05）。MCAO组和PSD组大鼠在行MCAO手术后1周内出现行为受限等功能障碍,之后一周逐渐恢复,PSD组进行MCAO联合CRS 3周,之后进行行为学测定,结果显示:PSD组大鼠的体重显著降低（P＜0.01 vs Ctrl）,PSD组大鼠的蔗糖水偏好指数显著降低（P＜0.01 vs Ctrl）;PSD组大鼠强迫游泳实验中的不动时间显著延长（P＜0.01 vs Ctrl）,强迫游泳实验中总活动度降低（P＜0.05vs Ctrl）,PSD组大鼠的旷场试验结果中水平运动的总距离及活动度降低（P＜0.01 vs Ctrl）,PSD组大鼠Y迷宫在新异臂时间、总活动度降低,但无统计学差异（P＞0.05vs Ctrl）。2.Western blot检测结果:PSD组大鼠左侧顶叶皮质区MKK6和MKK3蛋白表达降低（P＜0.05 vs Ctrl）,p-p38蛋白表达升高（P＜0.05 vs Ctrl）,p38蛋白表达升高,但无统计学意义（P＞0.05）;PSD组大鼠左侧海马MKK6（P＜0.05 vs Ctrl）、MKK3蛋白表达降低,p-p38蛋白表达升高（P＜0.05 vs Ctrl）,p38蛋白表达无统计学意义（P＞0.05）。PSD组大鼠左前额叶P38表达升高（P＜0.05 vs Ctrl）,p-p38蛋白表达无统计学意义（P＞0.05 vs Ctrl）;PSD组大鼠在左侧顶叶皮质、左侧海马、左侧前额中的凋亡相关蛋白Bax/Bcl-2表达升高（P＜0.05 vs Ctrl）;PSD组大鼠左侧顶叶皮质、左侧海马突触相关蛋白突触素SYP和PSD95表达降低（P＜0.05 vs Ctrl）,左侧前额叶突触相关蛋白突触素SYP和PSD95降低,但无统计学意义（P＞0.05）。3.尼氏染色结果:Ctrl组海马各区及皮质区神经元细胞形态饱满、边缘清楚、排列紧密且整齐、饱满淡染的细胞核;MCAO组,PSD组和CRS组海马各区及皮质区神经元细胞形态结构异常、部分边缘细胞萎缩、变形、疏松,细胞数量减少,其中PSD组损伤较MCAO组和CRS组更甚。4.TUNEL染色结果显示:PSD组大鼠海马DG区、皮质区可见凋亡细胞,CRS联合MCAO可诱导大鼠脑组织神经元损伤、凋亡。结论1.CRS可诱导MCAO后大鼠出现焦虑和抑郁样行为。2.CRS联合MCAO可能通过激活p38 MAPK通路导致大鼠出现抑郁样行为。