山茶属红山茶组植物RAPD分类研究

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山茶属植物具有很高的观赏和经济利用价值;本文主要是利用RAPD技术对山茶属红山茶组植物进行分子分类鉴别。我们利用CTAB方法抽提山茶属植物叶片DNA,用Du—640核酸蛋白分析仪测定其浓度,配制成反应模板,再加入一定比例的Taq酶等试剂进行PCR反应,扩增DNA,对扩增产物进行琼脂糖凝胶电泳,检测多态性。然后用聚类分析软件分析实验结果,绘制聚类图。实验确定最佳反应体系为:DNA模板5μl(25ng),10xBuffer 2μl,2mMdNTPs 2μl,25mM Mgcl2 1.8μl,10mM primer 1.2μl,5U Taq酶0.2μl,ddH2O 7.8μl,共计20μl。最佳循环条件为:94℃ 7min,1个循环;94℃ 45s,36℃ 45s,72℃ 90s,36个循环;94℃ 7min,1个循环,4℃保存。 在红山茶组植物RAPD实验研究中,我们共筛选了23种随机引物,扩增出了173个标记位点,其中多态性位点137个,占77.35%。用聚类分析方法对各分类群的相容关系进行聚类分析表明:秃苞红山茶(C.glabriperulata)与怒江红山茶(C.saluenensis)亲缘关系最近,宜归为一类。红山茶组植物可分为四大类,其中厚叶红山茶(C.crassissima)、离蕊红山茶(C.liberisamina)、尖锷红山茶(C.edithae)、钱叶红山茶、全缘红山茶(C.suvintegra)、浙江红山茶(C.chekiangoleosa)、长尾红山茶(C.longicaudata)、闪光红山茶(C.lucidissima)归为一类,可归入张宏达分类系统中光果红山茶亚组;绵管红山茶(C.lanosituba)、大方红山茶、赫江红山茶(C.heyhangensis)、毛蕊红山茶(C.mairei)、多齿红山茶(C.polydonta)、长柱红山茶(C.longistyla)、长毛红山茶(C.villosa)归为一类,可归入张宏达分类系统中毛蕊系;秃苞红山茶(C.glabriperulata)、怒江红山茶(C.saluenensis)、东安红山茶(C.tuanganica)、腾冲红山茶、滇山茶(C.reticulata)、隐脉红山茶(C.cryptonewa)、西南红山茶(C.pitardii)、栓壳红山茶(C.phellocapse)、毛籽红山茶(C.trichosperma)、大花红山茶(C.magniflora)、淑浦大花红山茶(C.grandflora)、西南白山茶归为一类,可归入张宏达分类系统中滇山茶系;短管红山茶(C.glabsipetala)自成一类。
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