微量疏水基修饰硅胶吸附磷脂催化合成磷脂酰丝氨酸的研究

来源 :西北大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:WTB2000
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
磷脂酰丝氨酸(Phosphatidylserine,PS)作为一种天然稀有磷脂被广泛应用于医疗与食品保健方面。其制备常以磷脂酶D(Phospholipase D,PLD)在水-有机相反应体系中进行生物催化得到;而有机溶剂的大量使用,使产品的安全性无法得到保障。因此,构建纯水介质体系进行稀有磷脂的制备具有较高的应用价值也十分必要。本文即两种方式构建了纯水介质体系以PLD进行催化合成PS。首先,以不同硅烷偶联剂对硅胶进行修饰化得到功能化载体,以载体表面的硅烷偶联剂为“锚”点,实现在纯水介质中直接对磷脂酰胆碱(Phosphatidylcholine,PC)进行吸附。对PC吸附过程进行了系统的研究,建立了吸附动力学模型,求解相关参数。以负载PC后的硅胶载体为底物,在水相中进行磷脂酰基转移反应,成功合成磷脂酰丝氨酸,载体表面不仅能够达到分散底物磷脂的作用,同时还是酶促反应的相界面。反应结束后采用椰子油为洗脱剂将得到的产物进行洗脱分离并制备成微胶囊产品,完成了由原料到产品的生产工艺过程。在此反应体系的基础上,为避免生物酶催化剂的生产消耗,降低生产成本,提高生产效率,本论文又提出一种全新的磷脂酰基转移反应的水-固反应体系。利用共价结合法将PLD固定于载体表面来形成吸附的“锚”点,并在载体表面保留一定的空间,酶蛋白自身由大量不对称疏水残基组成,在纯水介质中可以通过肽链自身的疏水作用实现对底物PC的吸附,以此为底物,进行磷脂酰基转移反应成功制备了PS。本论文主要探究了酶蛋白固定化率对PC吸附和PS制备的影响因素。通过该反应体系生产PS,不仅有效提高了反应效率和选择性,避免了有毒有害试剂的试用,而且通过固定化技术可以实现PLD的回收,提高生产效率,降低生产成本,避免了催化剂对最终产品的污染。主要实验结果如下:(1)以硅烷偶联剂辛基三甲氧基硅烷(n-octyltrimethoxysilane,OTMS)、十二烷基三甲氧基硅烷(n-dodecyltrimethoxysilane,DTMS)、十六烷基三甲氧基硅烷(n-hexadecyltrimethoxysilane,HDTMS)、3-氨丙基三乙氧基硅烷(3-aminopropyltriethoxysilane,APTMS)以及酯基化和羟基化的3-(2,3-环氧丙氧)丙基三甲氧基硅烷(γ-(2,3-epoxypropoxy)propytrimethoxysilane,GPTMS)对硅胶进行修饰化,并以修饰化硅胶为载体对PC进行吸附实验。结果表明,在修饰量为5×10-9mol/g的酯基化3-(2,3-环氧丙氧)丙基三甲氧基硅烷(Esterifiedγ-(2,3-glycidoxy)propyltrimethoxysilane,EGPTMS)载体表面PC吸附量达2.65×10-6mol/m2(0.5g PC/gsillica),PS的转化率达99%。此外,修饰化载体在重复利用20个批次后仍表现出良好的稳定性,硅烷偶联剂没有发生脱落泄露的情况。在反应结束之后用椰子油洗脱产物PS,用脱乙酰度为95%的壳聚糖为膜材对含PS的椰子油进行微胶囊产品化处理,得到包埋效果良好、分散均匀的微胶囊产品。(2)用硅烷偶联剂HDTMS和EGPTMS修饰的硅胶为载体分别建立了PC在硅胶表面的一步和两步吸附模型。通过模型,阐明了PC在修饰化硅胶表面的吸附过程。对提出的一步吸附模型通过线性变换进行拟合分析,得到的相关系数R2都大于0.97,说明提出的一步吸附模型符合吸附的过程;在一步吸附模型的基础上提出了两步吸附模型,实验结果表明PC在修饰化载体上的最大吸附密度达到了7.51×10-6mol/m2,且PC在两种载体上吸附的吉布斯自由能分别为-19.8和-14.7 k J/mol,小于PC在水相中形成胶束的吉布斯自由能19.5 k J/mol,说明吸附过程可以自发进行,不需要外界提供能量。之后在不同PC吸附密度条件下进行磷脂酰基转移制备PS,结果表明当吸附量在饱和吸附一半以下时PS产率达98%以上,随着吸附密度的增加PC在载体表面形成多层吸附,PS的产率反而减小,这也从实验角度证明了本实验所建立的吸附模型的相关符合程度。(3)针对水固相反应工艺中游离酶难以回收和重复利用活力降低等问题,首次提出以共价结合的PLD酶为“锚”点在吸附的同时进行磷脂酰基转移反应制备PS,实现PLD酶的重复利用与工艺流程的简化。实验结果如下:选择酶蛋白固定量为0.17mg蛋白/g硅胶的固定化酶为载体,加入量为80 mg(湿重),反应温度为35℃,p H为6.0,反应36 h后PS的的产率达95%。此外,采用流化床式反应器对PS进行了连续化反应工艺条件的探究,在流化速率为3 ml/min循环10次后PS的产率达到了98%,为实际的工业生产提供了理论指导。
其他文献
目的检测RA-ILD患者血清中抗氨基甲酰化蛋白(CarP)抗体水平,探讨其对RA-ILD早期诊断价值。方法选取宁夏医科大学总医院于2017年12月至2019年6月住院的186例RA患者,收集其临床资料及血清标本,所有患者均行胸部CT,依据胸部CT分为RA-ILD组及单纯RA组,其中RA-ILD组129例,单纯RA组57例,ELISA法测定两组血清中抗CarP抗体水平,采用Mann-Whitney
以6个辣椒自交系为材料,通过Griffing4完全双列杂交的方法配制了15个杂交组合。完全随机区组设计,三次重复,研究了7个外观经济性状和6个营养性状及对疫病的抗性鉴定,并对15个
荔枝(Litchi chinensis Sonn.)属于无患子科(Sapindaceae)荔枝属(LitchiSonn.),是我国南方具有重要经济价值的果树。荔枝是虫媒花和风媒花,花挥发性物质可能是吸引蜜蜂授粉的
碳纤维织物是复合材料的增强结构骨架,它可以有效提高复合材料的特性,使其具备一定的抵抗应力集中、缓解冲击损伤以及防止裂纹扩展等能力。碳纤维角联织机在织造过程中纱线路
目的:通过Meta分析探讨近端胃切除和全胃切除两种术式治疗东亚地区早期近端胃癌患者的疗效优劣。方法:分别检索PubMed、Embase、Cochrane Library、中国生物医学文献数据库、中国期刊全文数据库、万方数据库,收集TG与PG治疗术前诊断为早期近端胃癌患者的文献,评估2组患者的术中出血量、手术时间、术后住院时间、术后并发症发生率、5年生存率、肿瘤复发率、术后1年营养状况,使用RevM
节点的中介度(Betweenness Centrality)是度量节点在复杂网络中重要程度的一种重要指标;计算节点中介度在社交网络分析、交通网络治理、网络安全管理等广泛应用中起着关键性
顺序输送航煤的成品油管道内部积水和固体颗粒杂质不仅会影响航煤质量,还会增大管道的运行风险。利用水力清管的方式将管内积水和固体颗粒杂质沉积物清除出管道,可有效减缓航
在传统的整数阶振动方程中,无法准确的描述粘弹性材料的性质,我们使用分数阶导数形式来描述粘弹性材料,将分数阶应用到粘弹性材料的振动中,使本构关系变得简单。第一章阐述了
可溶性有机质(DOM)广泛存在于环境水体,也是化工废水中的主要污染物,DOM化学组成复杂,其分子组成和结构尚不明确。本文基于离子淌度质谱(IMMS)和傅立叶变换离子回旋共振质谱(
相比于其他的建设项目,城市轨道建设项目的资金需求较大,高造价成本也对于建设方提出了较高要求。整个城市轨道交通项目在完工后,还需要在维修保养、运营管理等方面投入较大的资金。单纯依靠政府部门的投资,往往会给政府部门带来较大的财政压力,同时政府部门往往缺乏专业的项目管理经验,这时候PPP模式的引入,为城市轨道建设项目的开展提供了可行性。除此之外,在PPP融资合作模式中,项目在规划设计、成本核算、施工管理