菲高效降解菌的驯化、分离、鉴定及其降解菲的特性与机理研究

来源 :华南理工大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:wylalone
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
多环芳烃(polycyclicaromatichydrocarbons,PAHs)是一类广泛存在于环境中的有机污染物。大多数的多环芳烃具有“三致”作用,通过食物链的传递会对生态环境和人体健康造成极大危害,因而这类化合物引起了环境学家们的关注。如何利用微生物的降解作用将其从环境中去除已成为人们研究的热点问题。 本论文以菲为多环芳烃生物降解研究的模型物,主要研究内容包括:(1)多环芳烃菲降解菌的驯化、筛选和分离;(2)降解菌株GY2B的鉴定、抗生素敏感性试验以及质粒的提取试验;(3)菲的降解特性研究,以及温度、pH、外加营养物质和初始底物浓度等因素对菌株GY2B的生长和菲降解的影响;(4)菲降解菌的底物降解范围研究;和(5)菲生物降解中间产物的分析及其代谢途径的推导。 选用水-硅油双相体系和单一水相体系两种方法来驯化多环芳烃降解菌。结果发现水-硅油双相体系筛选出的三种混合菌系:GY2、GS3和GM2对菲的降解效果要好于单一水相体系筛选出的菌。进一步研究确认这三种混合菌系在72h能分别降解99.9﹪、99.9﹪和91.9﹪的菲(初始浓度100mg/L)。通过平板涂布与划线,从混合菌GY2中分离出一株菲高效降解菌GY2B,48h对菲的降解率达到99.1﹪。 镜检表明菌株GY2B为革兰氏阴性无芽孢杆菌,16SrDNA序列分析表明其和鞘氨醇单胞菌的同源性最高,初步鉴定它为Sphingomonassp.GY2B,该菌株的GenBank登陆号是DQ139343。菌株GY2B对四种常用的抗生素:头孢呋辛、氯霉素、红霉素和四环素表现敏感,对羟氨苄青霉素中度敏感。且菌株GY2B没有明显的质粒DNA条带。 菌株GY2B的最佳生长温度是25~30℃,最佳pH值范围是7.1~7.4,对菲的降解在pH值7~10范围内都比较高。试验表明添加低浓度的蛋白胨或葡萄糖对细胞的生长和菲的降解都有一定促进作用,而葡萄糖的作用似乎更明显一些。但高浓度葡萄糖(≥500mg/L)的加入对细胞生长会产生毒害作用。 当菌株GY2B以10、60和100mg/L初始浓度的菲为唯一碳源时,48h菲的降解率均在99﹪以上,而230mg/L初始浓度下菲的降解率只有70﹪左右,此后菲浓度基本不再减少,到120h仍有大量的菲残留,此时菌株GY2B的细胞也大量死亡。进一步研究证实了高初始浓度(250mg/L)的菲样品中积累了一种中间产物——1-羟基-2-萘酸,之后的研究表明高浓度的1-羟基-2-萘酸对菌体细胞有抑制作用。另外,通过计算菌株GY2B在不同菲初始浓度下的比生长速率μ(对数生长期)发现底物菲的初始浓度和菌株的比生长速率μ之间没有显著的相关性。 底物降解范围实验表明:菌株GY2B能够以一定浓度的萘、菲、1-羟基-2-萘酸、2-萘酚、水杨酸、邻苯二酚、苯酚、苯和甲苯为唯一碳源和能源进行生长和繁殖,但不能利用和降解低浓度的1-萘酚、邻苯二甲酸和对苯二酚为唯一碳源生长。同时,菌株GY2B在降解水杨酸、1-羟基-2-萘酸和萘的过程中都有中间产物2-羟基粘康酸半醛,而降解邻苯二酚的过程有产物己二烯二酸。 试验还发现菌株虽然不能利用1-萘酚为唯一碳源生长,且1-萘酚对细胞有抑制作用,但是当一定浓度的1-萘酚和一定浓度的菲共存时,菌株GY2B能利用和降解部分的1-萘酚。 UV-Vis分析发现混合菌GY2和菌株GY2B降解菲的产物中有羟基与芳香环相连的结构以及酚酮结构的化合物。另外还证明菌株GY2B降解菲的过程中有1-羟基-2-萘酸和2-羟基粘康酸半醛这两种中间产物的产生。GC-MS分析发现菌株GY2B代谢菲的时候有中间产物水杨酸,1-萘酚和1-羟基-2-萘酸,以及微量的1-羟基-2-萘醛和1-羟基-2-萘酸甲酯。而混合菌GY2的代谢物中除没有水杨酸外,其余产物和菌株GY2B的一样。 通过底物降解范围试验、UV-Vis和GC-MS分析,推导出菌株GY2B降解菲的途径如下:在菌株GY2B的作用下,菲先开环生成1-羟基-2-萘酸甲酯和1-羟基-2-萘醛,然后转化成1-羟基-2-萘酸,经脱羧成为1-萘酚,再开环后生成水杨酸,通过邻苯二酚间位途径裂解生成2-羟基粘康酸半醛,最后进入三羧酸循环(TCA)彻底降解为二氧化碳和水。
其他文献
自动铺丝预浸纱作为自动铺丝工艺用原材料,对于自动铺丝技术的应用和发展具有重要的意义。本文以南京航空航天大学自行研制的七自由度自动铺丝机为应用背景,开展了自动铺丝预
电子封装材料的散热能力是保证高功率电子元器件正常工作的关键性因素。Diamond/Al复合材料热物理性能优异,是未来先进热管理材料的重点研究方向。本文以制备高热导率Diamond/
在新课改的影响下,教师要不断提升自身教学素养.在小学教学过程中,教师要注重学生的发展,尊重学生的个体存在.小学班主任不仅要负责传授知识,还要负责管理班级,班主任要加强
本文通过野外实地考察及遥感影像解译,获得了蓥华山景区的历史地质灾害点的空间和属性数据,在掌握了景区地质环境特征及地质灾害发育特征的基础上,选取适合景区的地质灾害评价指
本文通过对荣华二采区10
期刊
本文以实测潮位资料为基础详细分析了福建沿海台风暴潮的主要特征;在分析台湾海峡风暴潮、潮汐及地形特点的基础上,研制出台湾海峡双向嵌套网格风暴潮-天文潮耦合数值预报模式,
摘 要:历史教学作为人文类学科,其主要教学目的不仅仅局限于提高学生的历史知识水平,还注重对学生个人人文精神的塑造。在进行初中历史教学时,教师需要将人文精神与历史知识进行有机结合,在教学过程当中,合理的渗透人文素质教育,充分地发挥历史对学生今后成长所起到的人文精神、社会意识等多方面的综合性教学作用。  关键词:初中历史;人文精神教育;教学策略  人文精神是人类文化核心精神的一种体现,对整个人类文明的