基于纳米材料和荧光探针的核酸检测技术研究

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核酸是生命的遗传物质,它是维持生命各项机能正常运行的基本单元,其中,micro RNA是短的非编码RNA分子,参与细胞增殖,分化,凋亡和代谢等过程。micro RNA的异常表达会导致多种癌症,因此检测与疾病相关的micro RNA对疾病的早期诊断和治疗具有十分深远的意义。本论文将具有大比表面积,高表面反应活性等特点的纳米材料与传统的荧光生物传感器相结合,以micro RNA let-7a为检测靶标,建立针对micro RNA let-7a快速、灵敏的检测体系。(1)基于链式置换反应和氧化石墨烯的非酶放大micro RNA let-7a检测:实验通过recognition DNA、hairpin DNA和金纳米颗粒(Au NPs)制备了纳米探针(ds DNA-Au NPs),利用氧化石墨烯(GO)作为荧光共振能量转移的有利受体,来淬灭羧基荧光素(FAM)标记的fuel单链DNA中的荧光。当目标物micro RNA let-7a存在时,会依次触发两个级联的链式置换反应(TSDR),在这个过程中,目标物得以循环利用,并且从GO表面解吸大量吸附的fuel DNA,同时伴随着染料荧光的恢复。micro RNA let-7a的浓度与荧光恢复值成正比,从而实现对micro RNA let-7a的灵敏性检测,该方法可以达到3.9 p M的检测限和0.005-1 n M良好的线性范围(R~2=0.9957),该方法操作简便,灵敏性高,为micro RNA let-7a的检测提供了一种新方法。(2)基于碳点标记的荧光探针和氧化石墨烯的非酶micro RNA let-7a检测:实验以柠檬酸为原料合成荧光碳点(CDs),并替代传统的小分子荧光染料FAM标记于fuel单链DNA末端,基于GO淬灭荧光和两次TSDR建立了micro RNA let-7a检测体系。被CDs标记的fuel DNA充当能量供体和分子识别探针,GO充当FRET受体和荧光淬灭剂,当目标物micro RNA let-7a存在时,依次触发两次TSDR,目标物得以循环利用,并且从GO表面解吸大量吸附的fuel DNA(CDs修饰),CDs荧光恢复,荧光恢复值与micro RNA let-7a的浓度成正比。相比于传统的有机染料标记DNA,用CDs标记DNA合成的探针具有更强的生物相容性和更小的毒性,该方法对micro RNA let-7a的检测具有良好的灵敏度和选择性,可以达到7.8 p M的检测限和0.01-1n M线性范围(R~2=0.9868)。该方法操作简便,为micro RNA let-7a的检测提供了一种新思路,在未来的细胞检测和各种生物分析中有更好的应用前景。同时,也促进了新型纳米材料和生物学科的交叉发展。
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