B淋巴细胞刺激因子(B lymphocyte stimulator, BLyS),又称肿瘤坏死因子家族的B细胞活化分子(B cell-activating factor belonged to TNF family, BAFF)是一重要的肿瘤坏死因子超家族成员。增值诱导配体(APRIL,又叫TALL-2、TRDL-1及TNFSF-13)与BAFF的蛋白序列具有33%的同源性。穿膜蛋白活化物(transmembrane activator and CAML interactor, TACI)和B细胞成熟抗原(B cell maturation antigen, BCMA)是APRIL和BAFF共同的受体。本文中我们进行了人TACI胞外区功能域CRD2基因的克隆,基于受体和Fc的晶体结构,通过计算机模拟技术、分子对接方法,构建了人双受体融合基因酵母表达载体-pPIC9K-CRD2-TACI-IgGFc,实现了重组CRD2-TACI-Fc融合蛋白的诱导表达、纯化后进行了生物学活性的鉴定。旨在为进一步研究BLyS/APRIL与其受体的相互作用模式和开发用于治疗自身免疫疾病的BLyS/APRIL拮抗剂奠定基础。该项研究取得的主要结果如下：(1)经PCR成功克隆了编码人TACI的胞外段功能域CRD2基因,测序结果与GenBank结果一致。(2)扩增的TACI胞外区功能域CRD2与TACI-Fc段基因连接后插入真核表达质粒pPIC9K,成功地构建了重组真核表达质粒pPIC9K-CRD2-TACI-IgGFc。(3)上述质粒转化毕赤酵母GS115。经甲醇诱导,并优化诱导条件,获得了较高水平的表达。SDS-PAGE分析可见,在46kDa处有目的条带。Western Blot结果表明该蛋白与抗TACI抗体显阳性反应。蛋白序列的质谱分析结果表明,该重组蛋白的一级结构与所设计的DNA序列编码的氨基酸序列一致。ProteinA亲和层析柱进行纯化,得到高纯度的融合蛋白CRD2-TACI-Fc。(4)纯化的融合蛋白进行CCK-8检测,结果表明CRD2-TACI-Fc和TACI-Fc融合蛋白可以阻断APRIL对Raji B细胞系的促增殖作用,并且CRD2-TACI-Fc较TACI-Fc的阻断作用强。本项研究为进一步探讨SLE等自身免疫疾病的发病机制和生物学治疗方法奠定了基础。