HMGB1基因沉默对氧糖剥夺/复氧导致星形胶质细胞损伤的保护作用研究

来源 :重庆医科大学 重庆医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:ajunyx
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目的探讨高迁移率组蛋白(high mobility group box1,HMGB1)基因沉默对氧糖剥夺/复氧导致星形胶质细胞损伤的保护作用。方法将星形胶质细胞分为对照组、模型组、HMGBl siRNA组。模型组星形胶质细胞在无糖DMEM培养基、1%O2的培养条件下行2、4、6h时长的氧糖剥夺后复氧至24h。HMGBl siRNA组在氧糖剥夺/复氧前对星形胶质细胞转染载有HMGB1干扰序列的慢病毒,然后氧糖剥夺6h复氧至24h。Western Blot检测RNA干扰正常星形胶质细胞后HMGB1蛋白表达;RT-PCR测定星形胶质细胞HMGB1mRNA表达变化;ELISA法测定星形胶质细胞培养上清液中HMGB1蛋白的浓度变化;用乳酸脱氢酶(LDH)漏出率、MTT法检测星形胶质细胞的损伤情况及存活率。结果Western Blot检测结果示:与RNA干扰组比较,RNA干扰能明显抑制星形胶质细胞HMGB1蛋白表达(P<0.01)。RT-PCR及ELISA法检测示:与对照组相比,氧糖剥夺/复氧后,模型组星形胶质细胞HMGB1mRNA表达量和细胞培养上清液中HMGB1的浓度均有所增加(P<0.01),随着氧糖剥夺时间的延长,均呈现不断上升趋势(P<0.01);3、与对照组相比,氧糖剥夺/复氧后,模型组星形胶质细胞明显损伤,随着氧糖剥夺时间的延长,星形胶质细胞损伤加重,LDH漏出率不断增高(P<0.01)、存活率则逐渐下降(P<0.01);与模型组相比,氧糖剥夺/复氧后,HMGB1siRNA组损伤表现明显减轻,LDH漏出率水平明显下降(P<0.01),细胞存活率则显著上升(P<0.01)。结论通过RNA干扰技术可以抑制星形胶质细胞HMGB1的表达,HMGB1过表达可能是氧糖剥夺/复氧后引起细胞损伤的重要因素之一。
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