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目的:探讨甲状腺刺激性抗体(TSAb)对人甲状腺细胞功能影响的信号传导机制,初步揭示TSAb致Graves’病(GD)的分子机制。方法:1、以酶联免疫吸附法(ELISA)观察TSAb对原代培养人甲状腺细胞PKA和PKC活性影响。2、应用PKA、PKC激活和抑制剂及放射免疫分析法,观察PKA、PKC信号传导途径在TSAb刺激T3、T4分泌中的作用。3、应用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测甲状腺组织和细胞中TTF-1和PAX-8基因表达情况,并应用PKA、PKC激活和抑制剂观察PKA、PKC信号传导途径在TSAb对两基因表达影响中的作用。结果:1、TSAb呈时间剂量依赖性激活甲状腺细胞中的PKA和PKC,且PKA的活性明显大于PKC活性,PKA的活性达峰时间为30min,而PKC为60min。2、TSAb刺激甲状腺细胞T3、T4分泌的效应与PKA激活剂相似,且此效应可被PKA抑制剂抑制,PKC激活剂(TPA)和抑制剂则无上述效应。虽然TPA单独作用对甲状腺细胞T3、T4分泌无影响,但其可部分抑制TSAb和PKA激活剂刺激的T3、T4分泌,此作用可被PKC抑制剂逆转。3、GD甲状腺组织PAX-8基因表达量较正常甲状腺组织明显增多,而TTF-1基因表达量无明显增加。4、TSAb呈时间剂量依赖性刺激甲状腺细胞PAX-8基因的表达,此效应与PKA激活剂相似,且可被PKA抑制剂抑制,但不被PKC抑制剂抑制。TPA单独作用对PAX-8基因表达无影响,但与TSAb共同作用,却可抑制TSAb刺激的PAX-8基因的表达,其抑制作用可被PKC抑制剂逆转。TSAb对TTF-1基因表达无明显影响。结论:1、TSAb可激活人甲状腺细胞中的PKA和PKC,且PKA的活性明显大于PKC活性,但其刺激甲状腺细胞T3、T4分泌主要是通过cAMP/PKA信号传导途径,而与PKC激活无明显关系,但两信号途径之间存在“串话”,PKC信号传导<WP=4>途径可影响cAMP/PKA信号传导途径而抑制TSAb刺激的T3、T4分泌。2、GD患者甲状腺组织中PAX-8基因表达水平明显高于正常甲状腺组织。TSAb也可使人甲状腺细胞中的PAX-8基因表达增加,其作用主要通过cAMP/PKA信号传导途径。TSAb通过相似的胞内信号传导机制上调PAX-8基因表达和刺激T3、T4分泌,故提示TSAb通过cAMP/PKA信号途径上调PAX-8基因表达是其刺激甲状腺细胞功能亢进的机制之一。