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胃癌是最常见的消化系肿瘤,每年有1.4百万胃癌及胃食管癌病例被诊断,1.1百万患者死于胃癌,居恶性肿瘤死亡率的第2位,对人民群众的健康及生命康有着严重的威胁。大多数患者在被诊断为胃癌时已处于晚期,已经不适合手术治疗。虽然目前有多种胃癌放疗、化疗治疗方案,但对晚期胃癌患者的生存期,但生存率改善并不明显。胃癌的发生是一个多环节、多因素进行性发展的病理生理过程,与环境、饮食、幽门螺杆菌感染等有密切关系,同时也与癌基因激活、抑癌基因被抑制、生长因子参与等都有密切相关性,但目前对其发生发展的精确机制尚不完全清楚。因此,探索研究癌基因功能改变与胃癌发生发展及转移等恶性特征的关系,对揭示其发生发展的精确分子机制及发现新型生物标记物,并应用于临床筛查早期胃癌、设计有效治疗药物尤其是靶向于异常基因的生物学治疗及判断预后,具有重要意义。HER-2基因(human epidermal growth receptor2gene),又被称作ERBB2或HER2/neu基因。是1981年Shih等在首先发现的原癌基因,通常在人类胎儿期表达,仅在成人部分组织中低水平表达。HER2由染色体17q21上的基因编码相对分子量为185KDa的单链跨膜糖蛋白,和拓扑异构酶11a基因相邻,和编码鸟类骨髓成红细胞增多症病毒的原癌基因v-erbB相关。当生长因子与HER1,HER3或HER4结合后,改变了蛋白胞外区的构象,并能与HER-2受体分子形成异源二聚体。二聚体形成以后,HER2受体至少有三个不同的信号传导途径,PI3K, MAPK和PLCy途径。细胞内HER-2基因大量扩增,会引起其蛋白产物p185的过表达,使得HER-2受体异源二聚体数量增加,通过这些信号传递途径,作用于特定的信号蛋白,引起细胞增殖、分化和抗凋亡,从而诱发肿瘤的发生。由于HER-2基因受体位于细胞表面,容易与抗体接近,因此适合成为抗肿瘤免疫治疗的靶位。赫赛汀(Herceptin)是一种针对乳腺癌HER2靶点的靶向治疗性单克隆抗体,它能阻断HER2细胞外区域活化,诱导癌细胞抗体依赖的细胞毒作用(antibody-dependent cytotoxicity, ADCC),在早期和晚期(转移性)乳腺癌的治疗中均显示出较好疗效。研究显示,在HER2阳性乳腺癌妇女中,赫赛汀作为单药治疗、联用标准化疗或在标准化疗后使用,均可提高反应率、无病生存期和总生存期,同时保证生活质量。自1998年以来,赫赛汀已经在全世界用于治疗超过45万名HER2阳性乳腺癌患者。赫赛汀在治疗HER2阳性乳腺癌的成功,使得更多研究者将其应用于HER-2阳性的包括胃癌在内的其他肿瘤治疗。ToGA (Trastuzumab for Gastric Cancer)临床实验证实赫赛汀联合化疗方法能够有效提升HER2阳性胃癌或胃食管癌患者的平均生存期,而且赫赛汀联合化疗治疗效果与HER2表达水平相关。准确判断HER-2状态对选择适合赫赛汀靶向治疗患者至关重要。HER-2状态的检测方法主要包括免疫荧光原位杂交(fluorescencein situ hybridization, FISH)n组织化学(immunohistoche-mistry, IHC),和显色原位杂交(chromogenic in situ hybridization, CISH)3种。免疫组化因为成本较低而应用广泛,而荧光原位杂交被认为是判断HER-2状态的金标准。本研究将采用免疫组织化学及荧光原位杂交方法评估胃癌HER-2状态,并对胃癌Her-2是否存在异质性,及异质性对判读HER-2状态的影响进行研究。第一部分FISH和IHC检测胃癌Her-2基因状态的一致性研究目的：研究使用荧光原位杂交法(FISH)和免疫组织化学法(IHC)检测胃癌组织中人表皮生长因子受体2基因扩增和蛋白表达水平的一致性,并分析其与患者年龄、组织分化、临床期别、淋巴结转移状况等临床病理因素间的关系。方法：分别采用免疫组织化学染色法和荧光原位杂交法检测118例胃癌组织中Her-2蛋白表达及Her-2基因扩增状况,并进行数据统计对比分析。结果：118例胃癌组织中,IHC检测Her-2蛋白阴性表达40例(33.9%),阴性(+)为33例(14%),弱阳性或可疑阳性为(++)16例(13.6%),强阳性(+++)29例(25.6%)。FISH检测Her-2基因扩增38例,无扩增80例,Her-2基因扩增率32.2%。40例Her-2蛋白表达为(0)的标本中38例经FISH检测Her-2基因无扩增(95.0%)；33例表达为(+)的标本中30例无扩增(90.9%)；16例表达为(++)的标本中9例无扩增,7例扩增；29例表达为(+++)的标本中26例扩增(89.7%)。Her-2基因扩增状态与病人年龄、性别、肿瘤组织分化、临床期别、淋巴结转移无相关性。结论：Her-2蛋白表达为(0-+)或(+++)时,IHC和FISH检测结果较一致,两种方法总符合率为85.6%。IHC可作为初步筛查胃癌Her-2的首选方法。当Her-2表达为(++)时,则有必要进一步行FISH法检测。第二部分胃癌组织中Her-2状态的异质性及异质性对Her-2结果判读的影响目的：研究胃癌组织中Her-2表达状态是否存在异质性分布,及异质性分布对Her-2检测方法、结果判读的影响。方法：收集原发性胃癌临床病例148例,其中117例病人进行了胃癌切除术治疗,所有148病例均进行了内镜下活检。将切除的胃癌标本与活检标本分别进行免疫组化检测(IHC)和荧光原位杂交检测(FISH),显微镜下确认胃癌组织标本中Her-2是否存在异质性分布及对Her-2异质性分布对实验检测结果的影响。另对分别使用切除的胃癌标本与活检标本检测Her-2状态的一致性进行了分析。结果：在148例病例中,有29例被证实免疫组化检测结果阳性,25例和荧光原位杂交检测结果阳性。在29例免疫组化检测结果阳性胃癌组织标本中,23例(79.3%)被发现存在Her-2蛋白异质性分布；在25例荧光原位杂交检测结果阳性胃癌组织标本中,11例(44.0%)被证实存在Her-2基因扩增存在异质性分布。148例病例的切除的胃癌标本与组织活检标本在检测检测Her-2状态的总体一致性为93.2%。结论：胃癌组织中Her-2的异质性分布是荧光原位杂交检测结果与免疫组化检测结果不一致的主要原因；同时也是使用切除的胃癌标本与组织活检标本检测Her-2结果不一致的主要原因。胃癌组织中Her-2的异质性分布对基于Her-2基因的单克隆抗体靶向治疗疗效影响需做进一步研究。