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目的：葫芦素B是从植物瓜萎属中提取出来的三萜类化合物,是葫芦素家族中含量最丰富的的成员,研究表明葫芦素B具有保肝、抗炎及抗肿瘤等多种生物活性。然而葫芦素B抑制肿瘤细胞生长的分子作用机制尚不明确。在本论文中,我们探讨了,通过利用CoCl2诱导和TNF-α刺激肿瘤细胞后,葫芦素B对肿瘤细胞中缺氧诱导因子(HIF-1α)的蛋白表达情况及葫芦素B抗肿瘤作用机制的研究。方法：①通过双荧光素酶报告基因实验检测葫芦素B对肿瘤细胞HIF-1α转录活性的影响。②通过蛋白免疫印迹(Western Blot)实验检测葫芦素B对肿瘤细胞HIF-1α、HIF-1β、Topo-Ⅰ磷酸化-Akt (p-Akt)、Akt、磷酸化-mTOR (p-mTOR)、 mTOR、磷酸化-ERKl/2(p-ERK1/2)、ERK、磷酸化-p70S6K (p-p70S6K)、p70S6K、磷酸化-4E-BP1(p-4E-BP1)、4E-BP1、磷酸化-eIF4E (p-eEF4E)、eEF4E蛋白表达量的影响。③通过逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)实验检测葫芦素B对肿瘤细胞血管内皮生长因子(VEGF)、促红细胞生成素(EPO)和HIF-1α mRNA表达的影响。④通过ELISA实验检测葫芦素B对肿瘤细胞Hela上清液中VEGF蛋白浓度的影响。⑤通过裸鼠体内移植瘤的生长检测葫芦素B对抗肿瘤活性的影响。⑥通过HPLC检测葫芦素B在裸鼠心、肝、脾、肺、肾、瘤主要器官中分布情况。结果：葫芦素B对缺氧诱导条件下各种人癌细胞系中HIF-1α的活化具有明显的抑制作用,且这种抑制呈明显的剂量性依赖(随着药物浓度的增加,HIF-1α蛋白的表达量逐渐降低)。然而葫芦素B对HIF-1β、Topo-Ⅰ的蛋白表达没有影响。通过进一步实验分析表明,葫芦素B对HIF-1α蛋白的合成具有明显的抑制作用,对HIF-1α mRNA的表达及HIF-1α蛋白的降解没有影响。同时,我们也发现了葫芦素B在肿瘤细胞中通过对哺乳动物类雷帕霉素靶蛋白(mTOR);核糖体蛋白S6激酶(p70S6K);真核细胞起始因子4E-结合蛋白-1(4E-BP1);细胞信号外调节激酶-1/2(ERK1/2)等相关蛋白的去磷酸化作用有效地抑制了HIF-1a蛋白的积聚。此外,葫芦素B剂量性地激活了磷酸化的AKT(随着药物浓度的增加,磷酸化的AKT蛋白表达量逐渐升高)。通过相关文献报道也证实,在一些肿瘤细胞中mTOR的抑制剂可以明显地激活磷酸化AKT的蛋白表达量。同时,葫芦素B也能有效地抑制缺氧诱导因子-1α靶基因VEGF、EPO的表达。通过裸鼠体内移植瘤的研究进一步表明,葫芦素B有效地抑制了裸鼠体内肿瘤细胞的生长、侵袭与转移。结论：1.葫芦素B剂量性地抑制了HIF-1a的合成及HIF-1α靶基因VEGF、EPO的表达；对HIF-1α的降解及HIF-1α mRNA的表达没有影响。2.葫芦素B剂量性地抑制了HIF-1α相关蛋白mTOR/p70S6k/4E-BP1及MEK/ERK的磷酸化水平。3.葫芦素B剂量性地抑制了裸鼠移植瘤中肿瘤细胞的生长。