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目的:了解地区性耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(Methicillin-resistance staphylococcus aureus,MRSA)的分布现状、耐药趋势,补充本地区该菌分子流行病学资料及临床治疗MRSA感染方案。方法:1.收集贵州省某三甲医院2018年1月-2018年9月期间从临床患者伤口分泌物、痰、血液等样本中分离的金黄色葡萄球菌菌株,经过Phoenixtm-100全自动微生物分析系统进行初步菌种鉴定,运用该设备药敏系统收集菌株耐药情况。参考美国临床实验室标准化研究所(Clinical and Laboratory Standards Institute,CLSI)行M-H纸片法进行菌株确证实验加以验证。2.利用聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)技术检测MRSA常见的耐药基因mecA,毒力基因纤连蛋白结合蛋白A(fibronectin binding protein A,fnbA)、细胞内粘附素A(intracellular adhesion A,icaA)、剥脱性毒素A(exfoliative toxin A,eta)及杀白细胞素(Panton-Valentine Leukocidin,PVL),扩增结果与GenBank进一步比对。3.运用多重聚合酶链反应(multiplex polymerase chain reaction,Multi-PCR)的方法检测MRSA的SCCmec基因型。4.利用PCR技术扩增MRSA菌株的7个管家基因(arcC、aroE、glpF、gmk、pta、tpi、yqiL),进行多位点序列分型(Multilocus Sequence Typing,MLST)。MLST结果采用MEGA 7.0和eBURST软件进行遗传信息分析。5.对ST59组与非ST59组患者,HA-MRSA组与CA-MRSA组的耐药及毒力情况进行比较。上述结果采用SPSS22.0分析,连续变量的组间比较采用t检验,计数资料比较采用χ~2检验。小概率事件采用Fisher确切概率法检验(P<0.05表示差异有统计学意义)。结果:1.共收集MRSA菌株60株,经排除重复菌株及菌株鉴定后入选53株。药物敏感检测结果显示53株MRSA对青霉素、苯唑青霉素耐药率均达100%。对大环内酯药物克林霉素、红霉素出现高水平耐药,耐药率分别为81.13%、84.90%。对四环素、氨基糖苷类药物庆大霉素、喹诺酮药物环丙沙星、复方新诺明、利福平耐药率较低,分别为33.96%、15.09%、15.09%、7.55%、16.98%。未发现菌株对奎奴普丁/达福普汀、利奈唑胺、万古霉素耐药。2.受试菌株中,分离菌株最多来自于痰液样本,达33.96%,其次为伤口分泌物,占32.08%。在科室来源分布中,以骨外科、儿内科、ICU名列前茅,分别占16.98%、15.09%、9.43%。3.所有受试菌中有51株细菌mecA基因检测结果阳性,阳性率为96.22%。毒力基因fnbA、icaA检出率均为100%,PVL为30.19%,PVL阳性菌株以CA-MRSA为主(15/16,93.75%),未检出eta基因。4.SCCmec基因型分型以IVa型为主,共24株,占45.28%,III型共8株,占15.09%,II型、V型各1株,分别占1.88%,未分型达19株,占35.84%。5.53株MRSA菌株MLST结果显示共分为13个ST型,ST59(26/53,49.06%)为本实验的优势型,其等位基因谱为19-23-15-2-19-20-15-27。其次为ST4240(6/53,11.32%),ST239(5/53,9.43%),ST5(3/53,5.66%),ST45(3/53,5.66%),ST6(2/53,3.77%),ST630(2/53,3.77%);ST1、ST88、ST188、ST338、ST398及ST3935各1株。6.eBURST分析种群结构提示13个ST型可分为2个克隆型(ST239-ST630、ST59-ST338-ST4240),其中含1个CC338克隆复合体(ST59-ST338-ST4240),以及8个独特型(ST1、ST5、ST6、ST45、ST88、ST188、ST398、ST3935)。7.临床数据分析结果发现,非ST59组对环丙沙星、利福平、四环素的耐药率高于ST59组(P<0.05),CA-MRSA对环丙沙星、庆大霉素耐药率明显低于HA-MRSA(P<0.05)。PVL检出率在两种分组间无统计学差异。结论:1.该院MRSA感染部位以呼吸道、皮肤和软组织感染为主,与国内外报道一致。2.分子流行克隆检测结果提示该院CA-MRSA主要为ST59-MRSA-IVa型,HA-MRSA主要为ST239-MRSA-III型,与国内主要流行趋势相同。同时,目前已出现MRSA医院-社区相互传播的情况,提示监测MRSA分子流行病学必要性及采取措施控制感染与传播的重要性。3.该院MRSA毒力较强,耐药情况严峻,暂未发现奎奴普丁/达福普汀、利奈唑胺、万古霉素耐药株,临床相关科室需高度重视耐药菌株的监测。