【摘 要】
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哈密瓜细菌性果斑病是一种严重影响哈密瓜质量和产量的病害，由燕麦食酸菌西瓜亚种(Acidovorax avenae subsp．citrulli)引起。目前，关于该病原菌的分子遗传学研究较少。细菌的群
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哈密瓜细菌性果斑病是一种严重影响哈密瓜质量和产量的病害，由燕麦食酸菌西瓜亚种(Acidovorax avenae subsp．citrulli)引起。目前，关于该病原菌的分子遗传学研究较少。细菌的群体感应系统是近年来国内外研究的热点之一，许多植物病原细菌毒性因子的产生都依赖于群体感应(quorum-sensing，QS)，本文对燕麦食酸菌西瓜亚种群体感应系统进行了初步研究。本文(1)以Agrobacterium tumefaciens NTL4(pZLR4)为信号检测菌，对燕麦食酸菌西瓜亚种19个菌株进行了群体感应信号分子的检测，发现18个菌株能产生信号分子。(2)构建了燕麦食酸菌西瓜亚种的高效基因组文库，利用QS系统中信号合成基因在Escherichia．coli DH5α的异源表达，以A．tumefaciens NTL4(pZLR4)为信号检测菌，从菌株Pslb-94基因组文库中克隆到两个阳性转化子，p5ACC14和p5ACC40。(3)将克隆到的转化子p5ACC14通过电击导入Pseudomonasfluorescens 2P24△I，成功恢复了信号产生能力。(4)将p5ACC14进一步亚克隆，得到长5.5Kb左右的片段，通过核苷酸序列比对和保守结构域分析，发现其中有1个开放阅读框与NCBI中登陆的A．avenae subsp．citrulli AAC00-1NC008752群体感应基因的核苷酸序列同源性为100％，将获得的基因命名为aacI。(5)构建了aacI基因的原核表达载体，转化E．coli DH5α，通过报告平板检测，发现有信号产生，进一步说明aacI基因为群体感应信号合成基因。(6)通过对燕麦食酸菌西瓜亚种不同菌株和其他细菌luxI基因的序列比对，设计了一对特异性引物IS和IX，该引物能够特异性地区分哈密瓜果斑病和供试的其他细菌性病害，并检测浓度达到3×10~3CFU／ml。
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