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目的：核仁素是一种存在于肿瘤细胞表面的糖蛋白,在胰腺癌细胞表面过表达,是具有重要应用潜能的肿瘤靶标分子。本课题采用一种能与核仁素特异性结合的寡核苷酸适配体作为靶向分子,通过酸性敏感键与雷甲素耦联,构建一种新型的具有胰腺癌细胞靶向性的雷甲素-核仁素适配体耦合物入胞递送系统。在体外模拟人体内生理环境,探讨雷甲素-核仁素适配体耦合物的稳定性,从而推测该耦合物是否能有效递送至靶部位。此外,以胰腺癌细胞BxPC-3为实验组,正常胰腺细胞HPC-Y5和正常肝细胞L-02为对照组,考察该递送系统的靶向性以及与靶细胞的亲和性。方法：(1)通过Michael加成的合成方法,将丙炔酸烯丙酯与雷甲素通过形成烯醚键的方式链接起来；在四三苯基膦钯的催化条件下,得到了具有高活性的羧酸基团的中间体；最后再利用缩合剂DMT-TT,将雷甲素中间体与适配子通过酰胺键链接而形成了具有靶向性的雷甲素-核仁素适配子耦合物。(2)以游离雷甲素含量为检测指标,通过体外模拟人体内生理环境(pH7.5、pH7.O、pH6.8、pH6.5、pH6.O),采用反相高效液相色谱仪(RP-HPLC)检测雷甲素-核仁素适配体耦合物于不同时间点在血浆和不同pH值缓冲液中的断裂情况,计算释放出的游离雷甲素占耦合物的比例,确定烯醚键在不同环境中的断裂程度,从而推测该耦合物是否能有效递送至靶部位。(3)以胰腺癌细胞BxPC-3为实验组,正常肝细胞L-02和胰腺细胞HPC-Y5为对照组,采用流式细胞仪检测雷甲素-核仁素适配体耦合物与胰腺癌细胞的结合能力。采用荧光显微镜观察肿瘤细胞对耦合物的摄取情况。结果：(1)雷甲素与丙炔酸烯丙酯在N-甲基吗啉的催化条件下,以52%的产率得到了白色固体的3-(雷甲素基醚)-丙烯酸烯丙酯,再将其在金属催化剂条件脱去烯丙基得到了白色固体3-(雷甲素基醚)-丙烯酸,最后在缩合剂的催化下,以50%的产率制备得到白色粉末雷甲素-核仁素适配体耦合物。在各个合成的阶段,通过LC-MS, NMR,HPLC等分析方法来监测和鉴定目标产物,所得的分析图谱与目标产物特征相对应符合。(2)雷甲素-核仁素适配体耦合物在生理条件和血浆中稳定存在,随着pH值降低,游离雷甲素含量不断增加。当pH值降至6.0时,有超过60%的雷甲素从雷甲素-核仁素适配子体中释放。(3)胰腺癌细胞BxPC-3与核仁素适配体温育后,荧光强度明显增强,高于随机对照。而对照组细胞L-02和HPC-Y5与核仁素适配体温育后荧光强度与随机对照一致。BxPC-3细胞与雷甲素-核仁素适配体耦合物温育后,荧光强度与核仁素适配体产生的荧光强度一致。结论：本研究通过合成小分子化合物丙炔酸烯丙酯,再将其与雷甲素反应,从而构建了具有酸敏感性的烯醚键的中间体,最后与适配体缩合而形成的具有靶向性的雷甲素-核仁素适配子耦合物。这是国际上首次将具有酸性敏感的烯醚键用于构建核仁素与天然产物所形成的耦合物。该耦合物在生理条件和血浆中稳定存在,随着pH值降低,游离雷甲素含量不断增加。烯醚键可有效确保雷甲素-核仁素适配体耦合物在血浆和生理环境中稳定存在,从而保证该递送系统成功到达并进入靶部位。核仁素适配体对胰腺癌细胞具有良好的靶向性,可有效区分靶细胞和非靶细胞。适配体与雷甲素耦联后,并未改变其靶向性,仍可以特异性结合胰腺癌细胞,作为载体工具将雷甲素特异性靶向胰腺癌细胞并且摄入细胞内部,从而降低雷甲素对正常细胞和肝细胞的毒副作用,实现了适配体对雷甲素的选择性递呈作用。