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研究背景和目的：光动力疗法是现代肿瘤治疗中的一种新方法，其原理是利用恶性肿瘤能选择性摄入并潴留光敏剂，在特定波长的光激发下，引起一系列光化学反应导致肿瘤细胞的不可逆性损伤达到治癌目的。光敏剂的选择是肿瘤光动力治疗中的关键和核心问题。苯并卟啉衍生物单酸环A(BPD-MA)是种性能优良的新型光敏剂，具有化学结构明确、成份单一、量子产额高、吸收峰值位于长波段、选择性好、正常组织代谢快和避光时间短等优点。其介导的光动力治疗在皮肤肿瘤和眼内肿瘤的防治方面已表现出良好的应用前景。但到目前为止还未见应用BPD-MA治疗膀胱癌的研究报道，且BPD-MA光动力抑癌作用机制也有待深入探讨。本研究在建立体外BPD-MA光动力实验研究中光照系统并确定其主要参数的基础上，观察了新型光敏剂BPD-MA对人膀胱癌细胞株BIU-87光动力抑制作用，同时研究了BPD-MA光动力作用对人膀胱癌细胞株BIU-87增殖和凋亡的影响，并对其机制进行了初步探讨。旨在探索BPD-MA光动力治疗膀胱癌的可能性，为阐明BPD-MA光动力抑癌作用机制奠定基础。 方法和结果： 1．建立体外BPD-MA光动力实验中光照系统并确定其主要参数：1)新型光敏剂BPD-MA吸收光谱及实验用培养板、细胞培养液和缓冲液的光透射特性采用紫外可见分光分光度计测定。结果显示：BPD-MA的吸收峰值位于200～210nm，360nm，400～470nm，580nm，630～640nm和690nm，且波长为630nm以上的光均易透过实验用培养板及含10％小牛血清的RPMI 640细胞培养液。提示波长为632．sum的光不仅能激活新型光敏剂BPD－MA，而且易透过实验用培养板盖和含 10％小牛血清的 yMI 640细胞培养液。选择波长为632．sum的光作为本实验研究中的光源，并检测实验用培养板盖和含10％小牛血清的RPMll640培养液对该波长光的透射率。结果显示，实验用培养板盖和含10％小牛血清的nyMll640培养液对波长为632．sum光的透射率分别为89．98土0．02％、89二2土0刀3％，根据公式：细胞实际接受到的光剂量等于实验用光源光剂量X培养板盖透射率X培养液的透射率得出：到达培养细胞的光剂量等于实验用光源光剂量的80．18％，2）将体外培养的人膀眈癌细胞株 BIU－87接种于 24孔板，分组，暗室中加入BPD－MA，浓度分别为 1250、625、312．sng／ml，分别在孵育即刻、15、30、60、90、120、180分钟，用荧光分光度计测定BIU－87胞内光敏剂BPD－MA的荧光强度值，分析孵育浓度和时间对其吸收的影响。结果显示，人膀脱癌细胞株BIU－87对BPD－MA的吸收，在孵育90min时达最高峰，随后进入平台期石）体外培养人膀味癌细胞株BIU《7经1250ng／thl的BPD－MA孵育90min后，更换为不含BPD－MA的RPMll640细胞培养液，分别在即刻、10、15、20、30、60、90、120min，利用荧光光度计检测BIU－87胞内BPD－MA的荧光强度值。结果显示：BPD－MA孵育90min后更换为不含BPD｛MA的RPMll640培养液15Inin内人膀味癌株BIU87胞内BPD－MA荧光撤一不明显（P＞0．05），随后下降迅速。提示体外光动力实验时应选择在 BPD一MA与 BIU一87孵育 90ruin后、换液 15Inin内进行激光照射。 2．BPD－MA对人膀肤癌细胞株BIU七7的光动力抑制作用研究：体外培养的人膀肤癌细胞株BIU－87接种于96孔板，随机分组，每组设3复孔。在暗室中分别加入浓度为0l．5J25J250ng／ml的邵D－MA孵育90min，调整激光参数使照射到 BIU－87 细胞上的功率密度分别为 10、15、 X30m毗m‘，能量密度分另为0、0．3、0．6、l．2、2．4、4．SJ／cm‘，照光后继续培养24h，台盼蓝拒染法计算各组人膀肤癌细胞株BIU－87的存活率。结果显示BPD－MA光动力作用后人膀眈癌细胞株BIU－87的存活率明显下降，且其抑制作用强度随BPD－MA作用浓度和激光照射能量密度的增加而增强，但单纯激光照射和单纯光敏剂BPD－MA处理对＊－87存活率无明显影响。 3．BPD－MA光动力作用对人膀眈癌细胞株BIU－87增殖和凋亡的影响。及其机制研究：体外培养人膀肤癌细胞接种于细胞培养板，继续培养24／h时后，随机分成5组，每组设3复孔，即实验前对照组、BPD－MA光动力实验组、单纯激光照射对照组。单纯BPD－MA对照组和空白对照组。实验前对照组不作任何处理，直接采用培养24小时后的BIU—87细胞进行指标检测。空白对照组为不加光敏剂的假照射组。光动力实验组和激光对照组均采用 He．Ne激光照射（作用于细胞的功率密度为 10mwcmZ，能量密度为2．4J儿d火光动力实验组和单纯BPD－MA光敏剂组均使用625ng／ml的BPD－MA，暗室中加入，处理后继续培养24h，分别进行下述研究： （）BPD—MA光动力作用对人膀肤癌细胞株 BIU—87增殖的影响：采用MTT比色法检测各组细胞增殖代谢活性；‘H－TdR掺入法检测各组细胞DNA合成；增殖细胞核抗原（PCNA）兔疫组化染色检测PCNA表达水平。结果显示：BPD－MA光动力作用组OD值、CPM值显著低于对照组，P＊＊A表达水平明显低于对照