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第一部分miR-29b在慢性粒细胞白血病中的表达及临床意义慢性粒细胞白血病(Chronic myelogenous leukemia, CML)是一类起源于造血干细胞的疾病，该病的特征是9号染色体和22号染色体易位形成的bcr/abl融合基因，该基因编码的融合蛋白具有持续激活的酪氨酸激酶活性。Imatinib作为第一代BCR/ABL酪氨酸激酶抑制剂在CML的治疗中已经取得了很大的成功，该小分子抑制剂治疗效果好，毒性相对较低。但是，临床上对该药物的耐药越来越明显。因此，探索CML治疗的其他策略是如今迫切需要解决的一个问题。miRNA是一类发挥转录后调控基因表达的小分子RNA，目前已经在多种肿瘤中检测到miRNA的异常表达。差异表达的miRNA分子能通过靶向不同的基因发挥类似于癌基因或者抑癌基因的功能。已有研究显示miR-29b在CML急变期表达降低。为了研究miR-29b在CML中的作用，我们收集了CML病人和正常人的骨髓标本，采用实时定量PCR的方法检测了miR-29b的差异表达。实验结果显示，与正常人相比，miR-29b在CML中表达显著降低。该结果提示低表达的miR-29b可能在CML的发生发展中发挥重要的作用。第二部分miR-29b对白血病K562细胞的生物学效应在第一部分中，我们已经证明miR-29b在CML中表达降低。为了进一步探讨miR-29b对CML细胞生物学效应的影响，我们采用慢性粒细胞白血病急变细胞株K562细胞为研究对象，转染miR-29b模拟物上调K562细胞中miR-29b表达，分析了miR-29b对该细胞增殖、克隆形成能力、细胞周期及细胞凋亡的影响。MTT的结果显示经miR-29b处理后的K562细胞增殖减慢；克隆形成实验结果显示，与转染NC或者未转染的K562细胞相比，miR-29b显著降低了K562细胞的克隆形成能力；流式细胞术分析细胞周期结果显示miR-29b使K562细胞周期阻滞于G1期，定量PCR和Western blot的结果进一步证实miR-29b主要是通过上调p21和p27基因和蛋白水平而使细胞周期受阻；瑞氏染色可见miR-29b处理后的K562细胞出现明显的凋亡样改变，流式细胞术分析细胞凋亡显示早期和晚期凋亡细胞百分数增多，Western blot结果显示miR-29b主要是通过活化caspase3及其底物来诱导细胞凋亡，而且也检测到促凋亡蛋白BAX的上调和抗凋亡蛋白BCL-2的下调。这些结果提示，miR-29b能负向调控K562细胞的增殖并促进其凋亡。第三部分miR-29b调控慢粒细胞增殖及凋亡的机制研究我们在第二部分中已经证明miR-29b能参与调控K562细胞增殖和凋亡。为了进一步探讨miR-29b在其中发挥作用的具体机制，我们构建了携带ABL3’UTR的荧光素酶载体，通过双荧光素酶报告基因试验分析了miR-29b是否能直接和ABL的3’UTR结合。结果显示miR-29b与pMIR-ABL-UTR共转染HEK293细胞能显著降低相对荧光素酶活性，而与突变载体pMIR-ABL-UTRm共转染时未见荧光素酶活性降低。PCR及Western blot分析miR-29b转染K562细胞后BCR/ABL基因和蛋白水平的改变，结果显示miR-29b能同时降低BCR/ABL基因和蛋白表达水平。我们采用小干扰RNA干扰了ABL的表达(siABL)后分析了siABL对K562细胞生物学特性的影响，结果显示siABL与miR-29b一样，均能抑制K562细胞增殖及其克隆形成能力，通过诱导p21和p27的mRNA和蛋白表达阻滞细胞周期与G1期，并通过活化caspase3及其底物PARP诱导K562细胞凋亡。以上结果提示，miR-29b能直接作用于ABL的3’UTR进而参与调控K562细胞的增殖和凋亡。