青娥方对骨组织细胞OPN、BSP及其受体整合素ανβ3影响的研究

来源 :福建中医药大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:mym890419
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目的:  以骨吸收为切入点,通过动物实验,观察青娥方对去卵巢大鼠OPN、BSP及其受体整合素αv、β3的影响,探讨青娥方预防绝经后骨质疏松症(PMOP)的作用机制,为青娥方的临床应用提供实验依据。  方法:  1.实验动物分组、造模、药物干预及取材:选3月龄SPF级雌性SD大鼠120只,随机分为去卵巢组90只(切除双侧卵巢)、假手术组30只(除不摘除卵巢,其余同去卵巢组)。去卵巢组90只随机分成3组:青娥方组、骨疏康组、生理盐水组,统一于术后第3天开始灌胃,分别灌服青娥方3.6g/kg/d、骨疏康1.8g/kg/d、生理盐水2ml/只,假手术组余鼠30只亦灌服生理盐水2ml/只,每天一次。于连续干预4周、8周、12周后取材(分三个批次):取材前一天收集24小时尿液,离心去除沉淀,-20℃冻存待测;腹主动脉取血,离心取血清,-20℃冻存待测;分离胫骨、股骨、腰椎等骨组织,-80℃保存待测。  2.指标检测:Discovery Wi双能X线骨密度仪测定腰椎BMD;胫骨上段常规切片及HE染色,应用Motic Med6.0数码医学图像分析系统,定量分析骨组织形态;IG-A1000N万能材料试验机测定股骨最大载荷力(N), ELISA法检测血清中Cath-K、MMP-9、TRACP5b含量;ELISA法检测尿液DPD含量;生化法检测尿液Cr含量;第一、二腰椎分别检测OPN、BSP、Itgαv、Itgβ3、p38mRNA和蛋白的含量。  结果:  1.骨密度测定:随着取材时间的推移,生理盐水组腰椎BMD呈下降趋势,低于同期假手术组,在8周、12周时差异有统计学意义(P<0.01)。两用药组腰椎BMD均高于同期生理盐水组,在12W时差异有统计学意义(P<0.01)。  2.骨组织形态学分析:卵巢摘除后,随着取材时间的推移,生理盐水组骨小梁变化明显,骨小梁变细、变稀、不连续、完整性差,髓腔增大,形成大量骨陷窝。假手术组骨小梁分布均匀,排列规则,小梁间隙正常。两用药组骨小梁数目减少,骨小梁变细、不连续,骨小梁出现微小断裂,与同期生理盐水组相比,骨小梁数目减少幅度不大,排列相对较规则,结构完整性明显优于生理盐水组,骨小梁面积百分比亦明显高于同期生理盐水组,在8W、12W时差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05),青娥方组骨小梁面积百分比三个时间点均低于同期假手术组,在12W时比较有统计学意义(P<0.05)。  3.骨生物力学结果:卵巢摘除后,4W、8W、12W三个时期生理盐水组股骨所能承受的最大载荷明显低于同期假手术组(P<0.01或P<0.05)。青娥方组股骨最大载荷力高于同期生理盐水组,低于同期假手术组,在8周时与假手术组相比有统计学意义(P<0.01),在12周时与生理盐水组比较差异有统计学意义(P<0.01),两药物组三个时期相比,差异不明显,没有统计学意义(P>0.05)。  4.血清MMP-9、TRACP5b、Cath-K含量测定:随着取材时间4W、8W、12W的推移,生理盐水组血清MMP-9、TRACP5b、Cath-K先上升后下降趋势,高于同期假手术组(P<0.01或P<0.05),从数值上看,青娥方组血清MMP-9、TRACP5b、Cath-K均低于同期生理盐水组,除血清MMP-9在4W及血清TRACP5b在12W时与同期生理盐水组比较差异无统计学意义(P>0.05)外,其余时间点比较均有显著性差异(P<0.01或P<0.05)。  5.尿DPD/Cr比值:三个取材时间点,生理盐水组尿DPD/Cr比值逐渐升高,用药后,两用药组尿DPD/Cr比值先下降后升高,均低于同期生理盐水组(P<0.01或P<0.05)。两药物组三个时期相比,差异不明显,没有统计学意义(P>0.05)。  6.骨组织OPN、BSP、Itgαv和Itgβ3mRNA和蛋白含量结果:取材4W、8W、12W,生理盐水组四个指标mRNA和蛋白含量呈先升高后下降,高于同期假手术组(P<0.01)。药物干预后,两药物组四个指标mRNA和蛋白含量逐渐下降,低于同期生理盐水组(P<0.01)。假手术组的四个指标mRNA和蛋白含量逐渐升高,低于同期的两用药组(P<0.01或P<0.05)。  7.骨组织p38mRNA和蛋白含量结果:卵巢摘除后,三个取材时间点,生理盐水组骨组织p38mRNA和蛋白含量明显高于假手术组(P<0.01),用药后,两药物组骨组织p38mRNA和蛋白含量逐渐下降,青娥方组p38mRNA在8W、12W与同期生理盐水组相比有统计学意义(P<0.01),而青娥方组p38蛋白在12W时与同期生理盐水组相比差异才有统计学意义(P<0.01),两药物组相比,三个时间点比较差异无统计学意义(P>0.05)。  结论:  1.卵巢切除后,促进了OPN、BSP、Itgαv、Itgβ3的表达和相互作用,增强破骨细胞功能活性,从而导致骨质疏松的发生;  2.青娥方能通过下调骨组织OPN、BSP及其受体Itgαv、Itgβ3的表达,抑制去卵巢大鼠破骨细胞性骨吸收,发挥防治绝经后骨质疏松症的作用。
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