论文部分内容阅读
本研究以三个种源地(福建漳州、上海崇明、舟山普陀)‘玉玲珑’鳞茎盘为外植体诱导再生小鳞茎,以期找到鳞茎盘最佳消毒方法,得出最佳培养基,为离体快繁体系建立打下基础;三个种源地‘玉玲珑’的再生小鳞茎、上海种源地‘玉玲珑’中花梗、子房为外植体诱导愈伤组织,以期得到最佳愈伤诱导培养基;在相同培养基上诱导不同外植体,测定其在愈伤发生过程中内源激素含量与生理变化,为中国水仙离体发生过程提供一些生理方面的基础资料。主要研究结果如下:1.中国水仙鳞茎盘离体快繁体系构建(1)三个种源地‘玉玲珑’鳞茎盘最佳消毒方法不同。漳州和普陀:3%多菌灵溶液浸泡5 h+75%酒精50 s+20%次氯酸钠20 min+0.1%PPM培养基;崇明:3%多菌灵溶液浸泡5 h+75%酒精50 s+20%次氯酸钠20 min。(2)较高6-BA有利于鳞茎盘继代增殖。最佳增殖培养基:漳州与崇明:MS+9 mg/L 6-BA+1 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L NAA;普陀:MS+9mg/L 6-BA+0.5 mg/L 2,4-D。(3)最佳小鳞茎诱导培养基:漳州:MS+3 mg/L 6-BA+0.1 mg/L2,4-D;崇明和普陀:MS+3 mg/L 6-BA+0.1 mg/L 2,4-D+0.5 mg/L NAA。(4)生根率可达100%,最佳生根培养基:1/2 MS+15 g/L蔗糖+4.6 g/L卡拉胶+1.0 mg/L NAA+2g/L AC。2.愈伤组织的诱导(1)三个种源地‘玉玲珑’再生小鳞茎进行愈伤组织诱导,愈伤诱导率为56.67-58.89%,最佳培养基:漳州MS+3.0 mg/L 6-BA+3.0 mg/L 2,4-D+1.0 mg/L NAA;崇明MS+3.0 mg/L6-BA+3.0 mg/L 2,4-D+3.0 mg/L NAA;普陀MS+3.0 mg/L 6-BA+9.0 mg/L 2,4-D+1.0 mg/L NAA。(2)花梗诱导率最高可达100%,最佳培养基为MS+3.0 mg/L 6-BA+2.0 mg/L2,4-D+1.5-2.5 mg/L NAA+1.0 mg/L KT;表面刻伤未抽葶期子房可以提高诱导率;盛花期子房刻伤后诱导率没有明显提高。未抽葶期两类子房最佳诱导培养基分别为MS+2.0 mg/L6-BA+6.0 mg/L 2,4-D+2.5 mg/L NAA+1.0 mg/L KT;MS+1.0 mg/L 6-BA+6.0 mg/L2,4-D+2.5 mg/L NAA+0.5 mg/L KT。盛花期两类子房最佳诱导培养基分别为MS+3.0 mg/L6-BA+6.0 mg/L 2,4-D+3.5 mg/L NAA+0.5 mg/L KT;MS+3.0 mg/L 6-BA+6.0 mg/L2,4-D+1.5-3.5 mg/L NAA+0.5 mg/L KT。3.不同部位愈伤组织诱导过程中内源激素变化(1)引入培养指数评价不同外植体在相同培养基诱导愈伤组织综合效果。(2)在愈伤组织诱导过程中,启动期与分裂期的ABA、IAA含量较低,在形成期时,ABA含量较高,在形成期时IAA的变化出现不同,其中嫩叶、花药含量下降,而花梗、子房却上升。(3)嫩叶ABA/GA3愈伤诱导启动期上升,其他三种外植体下降,分裂期下降,其他三种外植体上升;子房ABA/GA3在形成期上升,其他三种外植体下降。花梗、花药与子房IAA/ZR在整个愈伤诱导过程中都下降。叶片与花梗在愈伤启动期时IAA/GA3变化趋势相反,在分裂期与形成期时变化相同。花药与子房ABA/ZR在启动期时下降,与嫩叶变化趋势相反,三者在分裂期与形成期均下降。4.不同部位愈伤组织分化过程中生理变化花梗、叶片在愈伤组织诱导过程中SOD、POD及CAT活力变化整体呈倒“V”型。花药POD、SOD、CAT变化趋势大致相同,子房POD、SOD、CAT变化趋势也大致相同。叶片等四种外植体在愈伤诱导过程中蛋白质含量均先下降,但花梗与叶片在第7 d消耗到最低,子房在第14 d消耗量达到最大,而花药是在第3 d时达到第一个低点,随后上升。叶片和花梗在第7 d后、子房在第14 d后蛋白质含量上升。四种不同类型外植体在可溶性糖的变化整体上均呈下降趋势。