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目的:探讨 p38 丝裂原活化蛋白酶(mitogen-activated protein kinase,MAPK)是否通过介导肺内皮细胞屏障功能障碍参与肺缺血再灌注损伤的发生发展。方法:1.将24只SPF级成年雄性SD大鼠随机分成4组(n=6):对照组(control组)、p38 MAPK抑制剂组(SB203580组)、缺血再灌注组(I/R组)、缺血再灌注+p38抑制剂组(I/R+SB203580)。I/R 组:大鼠开胸,用无创血管夹夹闭左侧肺门1h,随后松开血管夹再灌注4h。I/R+SB203580组:术前30 min给予SB203580(10 mg/kg)腹腔注射,其余同I/R组。病理学肺损伤评分、形态学以及超微结构的改变用于评价肺损伤程度。肺湿干重比值(W/D)、支气管肺泡灌洗液中蛋白质的含量、伊文思蓝的渗漏量用于评价肺内皮细胞屏障通透性。白介素1 β(IL-1β)、白介素6(IL-6)用于评价炎症反应。采用免疫印迹(western blot,WB)的方法检测肺组织中水通道蛋白1(aquaporin 1,AQP1)、细胞间粘附因子1(intercellular adhesion molecule 1,ICAM-1)、闭锁蛋白 1(zonulae occludente 1,ZO-1)、血管内皮细胞钙粘蛋白(vascularendothelial cadherin,VE-cadherin)、磷酸化p38 MAPK(p-p38 MAPK)蛋白的表达。采用免疫组化的方法检测肺组织中ZO-1、VE-cadherin蛋白的表达。2.将大鼠肺微血管内皮细胞分成5组:对照组(control组)、阴性对照慢病毒转染组(negative control lentiviruses,NC 组)、p38 MAPK 短发夹 RNA慢病毒转染组(sh RNA-p38 MAPK组)、氧葡萄糖剥夺再灌注组(OGD/R组)、氧葡萄糖剥夺再灌注+p38 MAPK短发夹RNA慢病毒转染组(OGD/R+shRNA-p38 MAPK组)。OGD/R组:将细胞放入无糖无血清的培养基,37℃含1%氧气、5%二氧化碳、94%氮气的特殊培养箱中培养1h后,置入有糖和血清的培养基以及37℃含5%二氧化碳和95%氧气的正常培养箱中继续培养4h。通过检测细胞活性以及细胞凋亡来评价细胞损伤程度。采用transwell法检测肺微血管内皮细胞屏障通透性。采用免疫印迹(western blot,WB)的方法检测肺组织中水通道蛋白1(aquaporin 1,AQP1)、细胞间粘附因子 1(intercellular adhesion molecule 1,ICAM-1)、闭锁蛋白 1(zonulae occludente 1,ZO-1)、血管内皮细胞钙粘蛋白(vascular endothelial cadherin,VE-cadherin)、磷酸化 p38 MAPK(p-p38 MAPK)蛋白的表达。采用免疫荧光的方法检测肺组织中ZO-1、VE-cadherin蛋白的表达。结果:与对照组和SB203580组相比,I/R组肺组织可见明显的炎症性改变,肺的超微结构损伤严重。而给予SB203580预处理后,肺组织的炎症性改变明显减轻,肺损伤程度明显减弱。I/R组大鼠肺W/D 比值、支气管肺泡灌洗液中蛋白的含量以及伊文思蓝的渗漏量都明显增加,说明肺内皮细胞通透性升高。给予SB203580预处理后,肺内皮细胞屏障的通透性明显下降。在细胞实验中我们发现,降低p38 MAPK的表达可以减轻氧葡萄糖剥夺再灌注引起的细胞损伤,降低肺微血管内皮细胞屏障的通透性。在动物实验和细胞实验中我们发现,抑制p38 MAPK的表达还可以升高肺缺血再灌注引起的AQP1、ZO-1、VE-cadherin的低表达,降低肺缺血再灌注引起的ICAM-1的高表达。结论:抑制p38 MAPK的表达可减少内皮细胞屏障功能障碍,从而减轻 LIRI。