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第一部分免疫共沉淀筛选SFRP5相互作用蛋白目的：免疫共沉淀筛选SFRP5相互作用蛋白。方法：免疫共沉淀分离SFRP5相互作用蛋白,聚丙烯酰胺凝胶电泳分离蛋白后银染,通过与对照组的比较切割差异蛋白条带,质谱鉴定、生物信息学分析,选取一个可能与SFRP5相互作用的蛋白质。结果：成功分离SFRP5相互作用的蛋白质,质谱检测差异银染条带筛选出7个差异蛋白,选取SLURP1为目标蛋白。结论：SLURP1可能是SFRP5的相互作用蛋白。第二部分验证SFRP5和SLURP1间的相互作用目的：SFRP5和SLURP1蛋白之间相互作用的验证。方法：提取脂肪组织T-RNA, PCR获的SFRP5和SLURP1基因片段,分别构建真核表达载体pCMV-HA-SFRP5和pCMV-Myc-SLURP1,利用PCR产物大小和DNA测序结果鉴定重组质粒是否成功,Western-blot检测蛋白表达情况。真核表达载体pCMV-HA-SFRP5和pCMV-Myc-SLURP1共转染HepG-2细胞,免疫共沉淀技术验证SFRP5和SLURP 1蛋白间相互作用。结果：真核表达载体pCMV-HA-SFRP5和pCMV-Myc-SLURP1成功构建,转染HepG-2细胞,HA蛋白抗体沉淀,Myc蛋白抗体检测,可见SLURP 1的表达；反之,Myc蛋白抗体沉淀,HA蛋白抗体检测,可见SFRP5蛋白表达。结论：成功构建了真核表达载体pCMV-HA-SFRP5和pCMV-My-c-SLURP1,成功验证SFRP5和SLURP1间的相互作用。第三部分SFRP5和SLURP1基因之间的影响和对胰岛素抵抗的作用目的：研究SFRP5和SLURP1基因间的影响和对胰岛素抵抗作用。方法：Q-PCR检测SFRP5 (SLURP1)基因在小鼠组织中的分布；SFRP5和SLURP 1过表达质粒分别转染hepG-2细胞,将细胞分为正常转染组和高浓度饱和脂肪酸处理组,Q-PCR方法检测SFRP5(SLURP1)表达上调对SLURP1 (SFRP5)的影响；用构建的三个不同目的片段的pGenesil-SFRP5和pGenesil-SLURP 1抑制质粒转染hepG-2细胞,Q-PCR方法筛选最佳抑制质粒；然后用pGenesil-SFRP5和pGenesil-SLURP1的最佳抑制质粒转染hepG-2细胞,检测TG、TC含量变化；同样用pCMV-HA-SFRP5和pCMV-Myc-SLURP1过表达质粒转染hepG-2细胞,检测TG、TC含量和葡萄糖摄取率(GUR)的变化；检测SLURP1基因在3T3-L1细胞诱导分化过程中表达变化。结果：SFRP5和SLURP1基因shRNA的最佳抑制率分别为68%和51.7%；不同小鼠组织均可见SFRP5基因分布,mRNA相对表达量由高到低分别为：脂肪、肌肉、脑、心脏、肝脏等；SLURP1基因mRNA相对表达量由高到低分别为：胃、皮肤、动脉、肺、心脏、睾丸、肌肉、脂肪等；无处理因素情况下SLURP1和SFRP5过表达质粒分别转染HepG-2, SFRP5或SLURP1表达无变化；SLURP 1和SFRP5分别转染过表达,然后用棕榈酸(PA)诱导,可见SLURP1变化对SFRP5影响显著,SFRP5变化对SLURP1影响效果不明显。脂肪诱导过程中SLURP1基因表达升高,第4天达到峰值；HepG-2细胞SLURP1基因过表达,检测SREBP-1C、ACC、FAS、SCD-1、HMGR mRNA, SREBP-1C、ACC、FAS表达降低,HMGR、SCD-1无变化。SLURP1基因过表达时TG、TC表达下降(P<0.05)、糖摄取增加(P<0.05)。SLURP1基因抑制,TG升高(P<0.05)、TC无变化。SFRP5基因过表达,TG降低(P<0.05)、TC无变化、糖摄取增加(P<0.05)。SFRP5基因抑制,TG升高(P<0.05)、TC无变化。结论：SLURP1基因过表达时可以抑制TG、TC,增加糖摄取。SFRP5基因过表达时可以仅可抑制TG。 SLURP1基因抑制时TG合成增加。SFRP5基因抑制时TG合成同样增加。