氟铃脲对斜纹夜蛾海藻糖酶活性及基因表达的影响

来源 :山东农业大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:spring2011
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斜纹夜蛾Spodoptera litura Fabricius属鳞翅目,夜蛾科,是一种世界分布的暴食性农业害虫。氟铃脲等类苯甲酰基脲类杀虫剂对斜纹夜蛾的杀虫作用被广泛认可,但是随着大量广泛而单一的使用,抗药性逐渐的增强,为了延缓和阻止斜纹夜蛾对氟铃脲抗药性的产生,也为了探讨了氟铃脲对斜纹夜蛾的作用机理,本试验以斜纹夜蛾为研究材料,研究氟铃脲对斜纹夜蛾表皮几丁质合成过程中海藻糖酶活性的影响,以及对海藻糖酶基因的转录表达的影响。主要研究结果如下:1.氟铃脲对斜纹夜蛾5龄幼虫和预蛹海藻糖酶活性和海藻糖含量的影响采用3,5-二硝基水杨酸法(DNS法),测定了氟铃脲与海藻糖酶直接作用和用氟铃脲处理幼虫后海藻糖酶的活性。氟铃脲和提取的海藻糖酶直接作用果表明,亚致死浓度氟铃脲对斜纹夜蛾5龄幼虫海藻糖酶的活性有抑制作用,抑制作用随着药剂剂量的增加逐渐增加,但增加幅度越来越小。用46mg/L、92mg/L和138mg/L亚致死剂量浓度氟铃脲连续处理5龄幼虫12-72h至预蛹,测定结果表明,当氟铃脲浓度为46mg/L时,幼虫海藻糖酶活力有一定程度的升高,表现出一定的激活作用;但随着处理时间的延长,激活作用呈逐渐降低趋势,至预蛹期抑制海藻糖酶的活性。当氟铃脲浓度为92mg/L和138mg/L时,幼虫和预蛹的海藻糖酶活性降低,表现出一定的抑制作用,并且高剂量的抑制作用显著(P<0.05),大于低剂量的抑制作用。采用改进的蒽酮法测定氟铃脲连续处理斜纹夜蛾5龄幼虫至预蛹海藻糖含量的变化结果表明,氟铃脲浓度为46mg/L时,海藻糖的含量有一定程度的升高;92mg/L和138mg/L时,海藻糖的含量均显著降低(P<0.05),并且高剂量降低程度大于低剂量的降低程度。2.斜纹夜蛾幼虫不同发育阶段体内海藻糖酶基因表达量的变化采用相对定量PCR法测定斜纹夜蛾幼虫自1龄后每12小时体内海藻糖酶基因的表达量,结果表明,可溶性海藻糖酶基因Treh-1在2龄、3龄及前后12h与5龄时表达量相对较高。膜结合型海藻糖酶基因Trhe-2在3龄前24h到4龄后24h、5龄时表达量相对较高。斜纹夜蛾幼虫在蜕皮期海藻糖酶基因表达量较高,这可能与此期需要更多的海藻糖酶分解海藻糖,为新表皮形成提供能量和物质有关。3.亚致死浓度氟铃脲对斜纹夜蛾幼虫海藻糖酶基因表达的影响3种亚致死浓度的氟铃脲浸泡饲料,饲喂斜纹夜蛾5龄幼虫24h、48h和72h,测定氟铃脲对斜纹夜蛾5龄幼虫海藻糖酶基因表达量的变化。测定结果表明,低剂量氟铃脲促进海藻糖酶基因的表达,高剂量氟铃脲可抑制海藻糖酶基因的表达。随着处理时间的延长,低剂量氟铃脲对Treh-1表达的激活作用呈一定程度的上升的趋势,对Treh-2表达的激活作用呈一定程度的下调,到处理72h后呈现出了抑制作用。高剂量氟铃脲对海藻糖酶基因表达抑制作用逐渐增强,处理48h、72h后差异显著(P<0.05)。
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