PTHrP和Ihh在猪脊柱侧凸模型椎体软骨终板中的表达及意义

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特发性脊柱侧凸(idiopathic scoliosis,IS)是临床上比较常见的一种脊柱三维畸形,尤其好发于儿童及青少年人群,其发病机制复杂,病因尚未明确。软骨内成骨是躯干骨形成的主要方式,椎体上下端的软骨终板在脊柱的纵向生长中发挥关键作用,其成骨的活性与侧凸的发生存在密切关系,受一系列内分泌激素及信号系统的精密调控。近年来研究者们已证实Sox9,FGF,TGF等细胞因子与特发性脊柱侧凸形成的关系,但Ihh-PTHrP信号系统对脊柱侧凸发生发展的影响却鲜见报道。Ihh是印度豪猪蛋白的简称,属于Hedgehog基因家族中的一种亚型,主要在前肥大和肥大软骨期细胞上表达,在软骨内成骨过程中起至关重要的作用;PTHrP基因定位于人第12条染色体,主要由关节处的软内细胞分泌,且作用于下层细胞,抑制肥大细胞凋亡和软骨细胞的进一步分化,是软骨增殖、分化及生长形成过程中的另一个重要因素。本实验通过对猪脊柱侧弯模型凹凸侧椎体软骨终板中Ihh、PTHrP表达水平的研究,推断其两侧软骨内化骨的差异,进一步探索特发性脊柱侧凸发生发展的分子生物学机制。目的:通过免疫组化方法来对Ihh、PTHrP在猪侧弯模型双侧椎体软骨终板中的表达水平及部位进行了解,证实Ihh与PTHrP在软骨中表达的相关性,探讨猪脊柱侧凸模型形成的分子生物学机制,为更深入地研究人特发性脊柱侧凸的病因学奠定基础。方法:取2月龄脊柱侧弯幼猪2只,随机编为1号、2号,自代偿弯椎体凸侧、中央及凹侧分别取下软骨终板共计48份作为实验组,分为A(凸侧)、B(中央)、C(凹侧)3组,每组16份;另取2月龄正常幼猪2只,随机编为3、4号,处死后自T10-L2椎体左右侧分别取下软骨终板共计32份作为空白对照组,分为D(左侧)、E(右侧)组,每组16份。通过免疫组化方法对5组软骨终板的Ihh、PTHrP的表达进行检测,观察两种因子在各组中的表达水平及部位,并检测其在各样本中的平均光密度值。结果:1、猪侧弯模型各节段椎体终板HE染色均存在类似长骨的生长板结构,呈淡蓝色,大致可分为储备区、增生区、成熟区及钙化区,实验组顶椎凹侧生长板较凸侧稍薄,双侧细胞数及细胞体积无明显差异,空白对照组间双侧未见明显差异;2、Ihh主要表达于软骨终板中的增殖软骨细胞及肥大软骨细胞胞浆中,PTHrP在软骨终板中的储备区、增殖区及成熟区软骨细胞胞浆中均存在表达,但以增殖区及成熟区软骨细胞中的表达为主;3、Ihh在A、B、C、D、E五组的表达量分别为0.3504±0.0233,0.2473±0.0286,0.1126±0.0306,0.2189±0.0366,0.2365±0.0226,PTHrP在A、B、C、D、E五组的表达量分别为0.4306±0.0154,0.2376±0.0248,0.1473±0.0229,0.2471±0.0218,0.2685±0.0456;A组与B、C、D、E组比较,p值均<0.01,具有统计学差异;C组与A、B、D、E组进行比较,p值均<0.01,具有统计学差异;B、D、E组进行比较,p值均>0.01,无统计学差异;4、对Ihh、PTHrP的表达进行简单相关分析,r值=0.585,p值<0.01,具有统计学意义,存在正相关关系。结论:1、软骨终板的成骨活性在实验组中凸侧明显高于凹侧,而在空白对照组双侧则无明显差异;2、Ihh、PTHrP在实验组中的表达为A(凸侧)>B(中央)>C(凹侧),这种差异性表达可能与猪脊柱侧凸模型的形成密切相关;3、Ihh、PTHrP在各组中的表达量存在差异,但两者表达呈正相关。
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