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牛白细胞介素2主要是由辅助性T淋巴细胞产生的一种淋巴因子,通过免疫网络调控机体免疫功能,在机体免疫反应中起着极为重要的作用。因其具有免疫增强剂、抗肿瘤和抗感染的特点是理想的免疫佐剂和免疫治疗剂。但正常情况下,机体产生的BoIL-2的量非常有限,一定程度上限制了对BoIL-2的研究和应用。本实验主要应用重组DNA和基因表达技术,通过RT-PCR方法克隆BoIL-2基因,并对其基因序列进行分析和表达,旨在为大量制备和生产高效价廉的BoIL-2,为其生物学活性及应用研究奠定基础。根据Genbank发表的BoIL-2基因序列,设计了一对引物。以ConA刺激的外周血淋巴细胞(PMN)为材料,提取总RNA,应用RT-PCR的方法,扩增BoIL-2基因序列。琼脂糖凝胶电泳显示目的片段约为477bp。测序结果显示,克隆的BoIL-2基因与Genbank发表的BoIL-2基因序列同源性为98.7%,氨基酸同源性为99.4%。将测序正确的pMD-18-T-IL-2重组质粒及pET30a(+)载体,用EcoRI及SalI进行双酶切,分别回收后T4连接酶进行连接,转化、提取重组质粒。通过双酶切及PCR鉴定阳性的重组质粒进行序列测定后在大肠杆菌的表达,分子量约为23.49ku;表达产物主要分布在包涵体中。Western Blot证实所得到的重组蛋白为BoIL-2重组蛋白。通过MTT法测定BoIL-2重组蛋白的活性,可知重组BoIL-2(rBoIL-2)对牛及山羊淋巴细胞有明显作用,对猪淋巴细胞作用不明显。用镍离子亲和树脂对所得的BoIL-2重组蛋白进行纯化,并免疫新西兰兔成功制备兔抗rBoIL-2多克隆抗体,为下阶段的研究提供了重要的实验材料。