由于抗菌药物的长期不合理使用,临床中耐药菌株不断地出现,导致常用的有效抗菌药物疗效降低甚至失效,然而,细菌的耐药现象并不只局限于抗生素,早已扩展到了消毒剂。与耐抗生素菌株一样,由于畜牧业、食品生产企业、医疗卫生机构及社区家庭中广泛地不合理地使用着消毒剂,抗消毒剂菌株也陆续出现。畜牧业中,养殖厂是应用消毒剂最频繁,使用量最大的场所,值得注意的是中低效消毒剂在低于最小杀菌浓度时,长期使用亚致死剂量可能促进细菌生态学变化,诱导其耐药性的产生。这种情况称为选择性压力,是细菌对消毒剂耐药的主要原因。虽然其耐药性严重程度尚不及抗菌药物的耐药性,但也值得引起人们的重视。本试验分别以临床分离大肠杆菌和人工诱导的大肠杆菌作为研究对象,对消毒剂与抗菌药物交叉耐药机制进行了初步研究,旨在为临床使用消毒剂奠定理论基础。1、临床分离大肠杆菌对抗菌药物与消毒剂交叉耐药性分析将实验室鉴定保存的104株临床分离大肠杆菌作为受试菌株,通过K-B纸法检测受试菌株对氧氟沙星、环丙沙星、庆大霉素、磺胺嘧啶等12中抗生素的耐药情况。同时,采用体外抑菌试验进行消毒剂(苯扎溴铵和醋酸氯已定)敏感性检测。确定临床菌株已对消毒剂有一定的耐药性。结果：104株大肠杆菌对抗生素的耐药率分别为氨苄西林87.5%氧氟沙星26.8%左氧氟沙星29.6%环丙沙星75%庆大霉素67.3%诺氟沙星29.6%氟啶酸24.3%洛美沙星11.5%氟罗沙星16.4%加替沙星19.7%磺胺嘧啶95.2%恩诺沙星20%；消毒剂对临床菌株的最小抑菌浓度明显高于质控菌株。结论：临床分离菌株对抗菌药物产生耐药性的同时对消毒剂也有一定的抗药性。结果提示临床中应合理使用消毒剂,对消毒剂耐药机制的研究应该受到重视。2、临床分离大肠杆菌消毒剂-磺胺耐药基因qacEΔ1—sul Ⅰ的检测利用细菌基因组DNA提取试剂盒提取104株受试菌株的DNA,以DNA样品作为模板通过PCR方法检测消毒剂-磺胺耐药基因qacEΔ1-sul Ⅰ的存在情况。结果：消毒剂-磺胺耐药基因qacEΔ1-sul Ⅰ检出率高达95.19%。结论：兽医临床中已经存在了携带消毒剂耐药基因的大肠杆菌,而且耐药基因检出率很高,提示临床应注意合理使用消毒剂。同时该基因同时编码消毒剂与磺胺类药物的耐药说明消毒剂耐药性与抗菌药物耐药性之间存在相关性,值得我们注意是qacEΔ1能够编码外排泵这为今后交叉耐药机制的研究奠定基础。3、人工诱导耐药菌株对消毒剂和抗菌药物交叉耐药性分析以大肠杆菌质控菌ATCC25922作为研究对象,采用多步法分别以亚抑菌浓度(1/2MIC)的消毒剂和抗菌药物为起点进行体外诱导,得到耐药性稳定的菌株。通过体外抑菌试验检测诱导前后消毒剂和抗菌药物对受试菌株的最小抑菌浓度(MIC)变化情况。结果：苯扎溴铵和戊二醛诱导前后除自身耐药外MIC变化最大的是土霉素增加500倍,其他抗菌药物MIC也有较高程度的增加；抗菌药物诱导前后消毒剂MIC变化最明显的是苯扎溴铵增加64倍,戊二醛MIC变化相对较小,同时其他抗菌药物的MIC也发生了较大的变化。结论：单一药物能够诱导大肠杆菌产生多重耐药性,人工诱导菌株对消毒剂产生耐药性的同时对多种抗菌药物产生了耐药性,反过来也成立,这说明细菌消毒剂耐药与抗菌药物耐药存在相关性。4、诱导前后外排泵基因acrA、mdfA表达量的研究通过试剂盒提取受试菌株的RNA,转录成cDNA,利用荧光定量PCR技术检测外排泵acrA、mdfA基因mRNA表达水平,旨在说明消毒剂与抗菌药物交叉耐药性与外排泵acrA、mdfA基因之间的关系。结果：苯扎溴铵诱导菌株acrA表达量增加约3.6倍,mdfA基因表达量增加约1.9倍；戊二醛增加倍数相对较小；喹诺酮类药物环丙沙星诱导后菌株A环acrA基因表达量变化最大,约为ATCC25922的9.5倍,mdfA基因表达量增加约6倍；其他抗菌药物增加倍数相对较小。结论：诱导前后大肠杆菌acrA和mdfA基因表达量均有不同程度的增加,说明该基因编码的外排泵数量增加,充分说明大肠杆菌产生的耐药性与外排泵机制相关,同时说明大肠杆菌对消毒剂和抗菌药物交叉耐药机制可能与外排泵相关。