DNA调控的银纳米簇的合成及生物传感研究

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近些年来,由Ag或Pt等金属的几个至几十个原子组成的新型荧光纳米材料因其优异的光谱和光物理性质而受到科学家们广泛的关注。金属纳米簇其半径小于2nm,拥有离散的电子能级,展示出显著的类分子性质,例如磁性,强荧光性质,并且可以作为一种荧光探针来进行生物检测。最近,以脱氧核糖核酸(DNA)为保护骨架合成的Ag纳米簇(DNA-Ag纳米簇)可作为一种新颖的荧光标记物,已在生物标记、生物/化学传感等诸多领域得到了广泛应用。本论文利用不同的DNA模板合成AgNCs,进而达到对单核苷酸多态性(SNP)的识别作用;并通过在合成的荧光性的银纳米簇中加入阴离子研究其DNA-AgNCs发光机制;以及利用设计合成的荧光银纳米簇为探针来检测CpG双核苷酸中胞嘧啶(C)到胸腺嘧啶(T)的转变。以下为主要研究内容:1.采用含有凸起位点的DNA (Bulge-DNAs)为模板,利用NaBH4为还原剂合成具有荧光性质的银纳米簇。该实验方法可以简单、快速、有效的识别单核苷多态性(SNP)。通过紫外可见光谱、荧光光谱等方法研究了以此为模板合成的银纳米簇(AgNCs)的荧光性质。实验结果表明:金属银纳米簇可以选择性的生长在有凸起位点的DNA上面,其荧光性质受到凸起位点碱基的性质的影响,当凸起位点碱基为胞嘧啶(C),金属银纳米簇荧光发射强度最强,从而达到对此类SNPs的原位检测。此外,本文还讨论了以此方法合成的荧光银纳米簇在Bulge位点空间内的稳定性,进一步说明了该实验方法的高效、便捷以及合理性。2.本文通过以4C-DNA为模板合成稳定的银纳米簇中,加入不同的卤素阴离子,讨论其对荧光银纳米簇的荧光光敏化作用。实验中通过荧光光谱,紫外可见吸收光谱,透射电镜以及X射线光电子能谱等表征手段进行研究,实验结果表明:在低浓度下加入不同的卤素离子(Cl-、Br-、I-)荧光银纳米簇的荧光发射位置没有变化,荧光强度确有很大程度的增强,然而浓度较高时荧光强度会发生很大程度的降低,阴离子和银纳米簇形成共价键之后使其荧光银纳米簇的荧光光敏度降低,这一现象表明阴离子的极化性会影响银纳米簇的荧光性质。3.本次工作通过设计凸起位点并合成银纳米簇,来检测CpG双核苷酸中胞嘧啶(C)到胸腺嘧啶(T)的转变。DNA二核苷CpG中的胞嘧啶(C)经常会发生碱基突变,转变成胸腺嘧啶(T),我们通过设计含有凸起位点的DNA为模板合成银纳米簇,使其作为一种荧光探针来检测该类碱基变异,通过荧光光谱,紫外吸收光谱,DNA熔点测试等表征手段来研究其银纳米簇荧光性质。实验表明:CpG转变成TpG时溶液中的银离子可以结合在此位点上,通过加入NaBH4使之还原,具有较强的荧光。荧光银纳米簇作为一种有用的无机荧光探针来检测其二核苷酸的变异。我们实验发现通过对比CpG、GpG以及ApG, TpG中胸腺嘧啶(T)可以更有效的合成荧光银纳米簇,并且我们设计的该Bulge模板可以原位合成银纳米簇,进而变异的CpG到TpG模块会被快速有效的检测出来。此外,我们设计的凸起位点还与之前的脱碱基位点的模板做了对比,可以看出该试验方法对TpG的检测是一种快速,简便、有效的方法。
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