猪传染性胃肠炎（Transmissible gastroenteritis of pigs，TGE）是由猪传染性胃肠炎病毒（TGEV）引起的猪的一种急性、高度接触性肠道传染病。不同年龄和不同品种的猪对本病都易感，2周龄以内的仔猪具有高度感染性，以仔猪呕吐、严重腹泻和脱水为主要临床特征，致死率可达100％。本病常常由于混合感染和细菌继发感染，难以确诊，缺乏有效疫苗，给各国养猪业带来极大危害。对TGEV的研究表明，S基因编码的S蛋白，是诱导机体产生中和抗体和提供黏膜免疫保护作用主要的结构蛋白。其上的重要保护性抗原位点A、D，在诱导机体产生中和抗体中起关键作用。A位点缺失可导致S蛋白不能产生中和抗体，丧失黏膜免疫保护功能。D位点在中和抗体产生中也起着重要的作用。由此可见，对于S基因重要保护性抗原位点A、D基因的克隆及表达的研究就显得尤为重要。本研究根据Genbank上发表的TGEV-TH-98株S基因cDNA序列，设计并合成了一对扩增A、D位点的引物P1，P2。将自行分离的TGEV-JL毒株接种于单层PK-15细胞增殖病毒。提取TGEV-JL株基因组RNA，通过RT-PCR扩增出含A、D两抗原位点的目的片段S₁基因，片段大小为1218bp。将S₁基因克隆到pMD18-T克隆载体，构建成重组质粒pMD18-S₁。对pMD18-S₁进行鉴定后，再将S₁基因亚克隆到pET-32a原核表达载体的EcoRⅠ和SalⅠ之间的多克隆位点上，进而构建了重组原核表达质粒pET-S₁。将重组表达质粒pET-S₁转化到表达宿主菌BL21中，用终浓度为1mmol／L的IPTG对宿主表达菌诱导表达。经SDS-PAGE分析表达产物，结果表明：S₁基因在原核表达系统pET-32a中获得表达，表达的重组蛋白大小约为44KD。Western-blot检测表明，表达的重组蛋白能够被TGEV阳性血清所识别。由此说明，表达的重组蛋白具有良好的反应原性。上述结果提示，克隆的S₁基因读码框架正确，可在乳酸杆菌中得到表达，为下一步构建乳酸杆菌穿梭表达载体，研制乳酸杆菌基因工程疫苗奠定基础。同时，该原核表达载体的构建及表达成功，为TGE诊断研究奠定基础。