论文部分内容阅读
目的1观察结直肠癌中COX-2(cyclooxygenase, COX-2)、 hMLH1和hMSH2的表达情况。2 观察3种非甾体类抗炎药（non-steroidal anti-inflammatory drugs,NSAIDs）－COX-2非选择性抑制剂:aspirin和indomethacin；COX-2选择性抑制剂:NS-398对人胃腺癌细胞株MKN-45、SNU-1和结肠腺癌细胞株LS-174-T的影响。材料与方法1 COX-2、 hMLH1、 hMSH2在结直肠癌中的表达1.1 材料：结直肠癌手术切除标本78例，其中腺癌58例，粘液腺癌13例，印戒细胞癌7例。正常结肠粘膜6例。1.2 应用免疫组织化学技术（SP法）检测正常结肠粘膜组织和结直肠癌组织中COX-2、 hMLH1、hMSH2蛋白的表达。1.3 统计学处理：应用SAS软件对实验结果进行统计处理， 用卡方检验分析在不同组织学类型、有无淋巴结转移有无侵透浆膜以及不同性别等不同情况的组织中COX-2、 hMLH1和hMSH2表达水平的差异。检验水准为0.05。2 胃癌、结肠癌细胞的培养采用MTT法，检测3种NSAIDs对MKN-45、LS-174-T细胞生长的影响。采用台盼蓝染色法，观察药物作用后SNU-1细胞的活力变化。采用流式细胞技术，研究药物对培<WP=4>养细胞凋亡率的影响。细胞爬片HE染色，观察药物对细胞形态的影响。透射电镜、扫描电镜观察药物作用后细胞的超微结构变化。采用两样本Student’s-t检验，方差分析，检验水准均为0.05。结果1 COX-2、 hMLH1、hMSH2在结直肠癌中的表达1.1免疫组织化学结果hMLH1和hMSH2在正常结肠粘膜组织中阳性表达，而COX-2不表达。COX-2在78例结直肠癌组织中表达的阳性率为74.36%（58/78）。hMLH1和hMSH2在78例结直肠癌组织中表达的阴性率分别为29.49%（23/78）、28.21%（22/78）1.2 COX-2、hMLH1及hMSH2的表达水平与临床病理特征COX-2在有无淋巴结转移的不同病例中的表达水平有差别，有淋巴结转移组COX-2高表达的比例高于无淋巴结转移组，统计学差异显著，P<0.05。进一步检验可知COX-2的表达水平与有无淋巴结转移呈完全正相关关系，rs >0；对rs进行显著性检验，P<0.01。在不同性别、不同组织学类型、有无侵透浆膜之间表达水平无差别,P >0.05。hMLH1在不同组织学类型之间的表达水平有差别，3种组织学类型中，在腺癌中hMLH1高表达者所占比例最高，粘液腺癌中最低，统计学差异显著，P<0.05。而在不同性别、有无淋巴结转移、是否穿透浆膜之间表达无差别，P >0.05。hMSH2表达水平在不同性别、有无淋巴结转移、不同<WP=5>组织学类型及是否侵透浆膜之间无差别，P >.05。2 NSAIDs对人胃腺癌细胞株MKN-45、SNU-1,人结肠腺癌细胞株LS-174-T的作用2.1 NSAIDs对细胞生长的影响NSAIDs对上述三株细胞的生长均有抑制作用，且呈时间、剂量依赖方式。在同一株细胞达到相同的抑制作用，NS-398所需浓度几乎总是最小的。2.2 流式细胞术检测结果方差分析结果表明，药物作用时间和浓度是影响凋亡率的重要因素。aspirin 的浓度对MKN-45细胞的凋亡率有影响（P<0.05），相同作用时间，凋亡率有随浓度增大而增大的趋势；而作用时间对凋亡率无影响（P>0.05）。indomethacin和NS-398以时间、剂量依赖方式影响MKN-45细胞的凋亡率（P<0.05）。在SNU-1细胞和LS-174-T细胞,3种药物以时间、浓度依赖方式影响细胞的凋亡率（P<0.05）。在同一株细胞诱导相同的凋亡率，NS-398所需浓度几乎总是最小的。2.3 细胞爬片HE染色结果药物作用于细胞后，光镜观察细胞的形态未见明显变化。2.4 电镜观察结果透射电镜观察SNU-1细胞呈圆形，胞核较大，胞浆较少。在较低浓度aspirin作用下，细胞的染色质有边集现象，胞浆内可见大量空泡。扫描电镜观察发现，药物作用后，MKN-45细胞表面的小泡有脱失现象。结论 <WP=6>1 COX-2、 hMLH1、 hMSH2在结直肠癌中的表达hMLH1和hMSH2在正常结肠粘膜组织中阳性表达，而COX-2不表达。COX-2在结直肠癌组织中有较高的阳性表达率。hMLH1和hMSH2在结直肠癌组织中有一定的阴性率。COX-2的表达水平与有无淋巴结转移呈完全正相关，有淋巴结转移组COX-2高表达的比例高于无淋巴结转移组，提示在结直肠癌中COX-2高表达可能是有淋巴结转移的一个分子学标志。2 NSAIDs对人胃腺癌细胞株MKN-45、SNU-1,结肠腺癌细胞株LS-174-T的影响NSAIDs可抑制体外培养的肿瘤细胞的生长，具有细胞毒性作用。且有随浓度的增加，作用时间的延长抑制作用、细胞毒性作用增强的趋势。流式细胞检测结果显示NSAIDs可诱导体外培养的肿瘤细胞凋亡，提示NSAIDs可能通过诱导细胞凋亡而发挥其抗肿瘤作用。