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目的:N-乙酰氨基葡萄糖转移酶V(N-acetylglucosaminyltransferase V,Gn T-V)是N-乙酰氨基葡萄糖转移酶家族中的一员,它主要作用是催化N-联接聚糖形成,调控细胞的生物学功能,参与细胞的粘附、迁移、侵袭和细胞内信号传导等过程,并发挥着重要的作用。以往关于Gn T-V的研究主要集中在与肿瘤的恶性程度的关系上;而有关于Gn T-V在人类胎盘中的研究很少。所以,本实验将从以下几个方面对Gn T-V在胎盘上的作用进行探讨:(1)首先,利用组织标本(正常早孕和晚孕胎盘,后者又包括Normal control组和PE组),检测Gn T-V定位的情况,和在PE中Gn T-V的表达是否有变化;(2)采用来自人绒毛外滋养细胞的细胞株HTR8/Svneo以及,人脐静脉内皮细胞株HUVECs(human umbilical vein endothelial cells)来检测Gn T-V的表达,研究Gn T-V对二者细胞生物学功能的调控;(3)对HTR8/Svneo细胞以及HUVECs进行H/R的处理,模拟PE初期的氧化应激损伤,探究Gn T-V基因是如何通过FAK-ERK信号通路调控滋养细胞以及内皮细胞的生物学功能,并最终引起PE发病的相关机制。方法:(1)通过IHC的SP法检测早孕期以及晚孕期胎盘组织中Gn T-V的表达水平、定位的情况。(2)采用WB和q RT-PCR研究Normal组和PE组Gn T-V的表达的变化。(3)通过慢病毒sh RNA转染,下调人滋养细胞株(HTR8/Svneo细胞)、脐静脉内皮细胞株(HUVECs)和早孕期绒毛外植体中Gn T-V的表达,并采用q RT-PCR、WB检测Gn T-V sh RNA的干扰效率,并使用FCM检测细胞的凋亡,MTT法检测细胞增殖情况。(4)通过Transwell法的迁移和侵袭实验下调了Gn-V后HTR8/SVneo、HUVECs细胞生物学功能的改变。(5)采用管腔成型实验检测Gn T-V是否影响HUVEC形成管样结构的潜能。(6)利用原代模型(绒毛外植体),评估Gn T-V对绒毛外滋养细胞的外生性迁移影响。(7)收集绒毛外植体和两种细胞的培养上清液,使用明胶酶谱法检测其中的MMP2/9活性;WB检测TIMP1/2的蛋白表达水平。(8)对HTR8/SVneo、HUVECs进行缺氧/复氧(H/R)处理,了解其对细胞生物学功能以及Gn T-V的表达情况的影响。(9)最后将细胞置于缺氧/复氧,的情况下,通过干扰Gn T-V基因及阻断其下游FAK-ERK信号通路观察细胞功能是否发生改变,从而了解Gn T-V调控细胞的功能在胎盘的发生和在PE发病中的作用和影响。结果:(1)通过IHC,我们发现Gn T-V在正常胎盘组织(早孕和晚孕)及PE组织中均有表达,主要定位于CTBs、STBs、TC中和血管内皮细胞(ECs)的胞浆内。而Gn T-V在蜕膜组织中,主要表达在EVTs和蜕膜细胞(DCs)中。且Gn T-V在PE组的表达较Normal组有升高的趋势。(2)在HTR8/Svneo细胞和HUVECs中干扰Gn T-V的表达,可促进前者的迁移和侵袭能力和后者的迁移和管样结构成型的潜能。(3)通过对HTR8/Svneo细胞以及HUVECs缺氧/复氧处理,可导致其功能减弱,伴随着Gn T-V表达上升。而我们还发现H/R处理使得了两个细胞中的FAK-ERK通路发生了明显活化。(5)使用sh RNA干扰Gn T-V基因表达和ERK1/2特异性的抑制剂PD98059阻断FAK-ERK通路,都对H/R所致的细胞功能受损有明显的改善。结论:(1)Gn T-V参与对滋养细胞和内皮细胞的细胞功能的调控,可能在整个妊娠期间都发挥着作用。(2)下调Gn T-V的表达促进HTR8/Svneo细胞的侵袭和迁移能力,促进HUVECs迁移及管样结构成型的潜能。(3)在氧化应激的损伤下,Gn T-V的表达上升,可通过调控FAK-ERK信号通路减弱滋养细胞的侵袭力和内皮细胞的管样结构成型的潜能,从而参与PE的发病。