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本文对湛江市麻章区、东海区和霞山区3个红树林保护区的红树叶斑病进行初步调查,着重对分离自红海榄赤斑病同一病斑上的两株病原菌PI-1和PII-3进行鉴定和生物学特性研究,主要结果如下:
(1)病害发生情况调查结果表明,该地区红树叶斑病尚未造成严重危害,但病害仍有发生,主要危害卤蕨(Acrostichum aureum)、秋茄(Kandelia candel)和红海榄(Rhizophora stylosa)。病原菌分离鉴定结果表明,炭疽菌(Colletotrichum sp.)和拟盘多毛孢菌(Pestalotiopsis sp.)是主要病原菌。致病性与寄主范围测定结果发现,这些病原菌除了能对原寄主致病之外,还能对其他部分红树植物致病,但不能对非红树植物致病。
(2)红海榄赤斑病病原分离结果表明,同一病斑上分离到菌落形态特征存在较大差异的两株病原菌(PI-1和PII-3),其中在PDA平板培养基上菌株PI-1的菌落呈灰白色,花瓣状,气生菌丝不多,菌落背面呈黑色轮纹状;菌株PII-3的菌落白色,气生菌丝较多,呈绒毛状,菌落背面呈橘黄色轮纹状;同时,菌株PI-1分生孢子的长度比PII-3的略短,中间色胞的颜色比PII-3略深。经Koch法则验证,PII-3致病性比PI-1稍强,两菌株均具有一定的寄主专化性。两菌株ITS序列分析表明,PI-1菌株的ITS序列长度为565bp(GenBank登录号:EU644754),PII-3菌株的ITS)芋列长度为576bp(GenBank登录号:EU644755),经BLAST分析,与两菌株的ITSS序列同源性达98%~100%的菌株均为拟盘多毛孢,并由此进一步用NJ法构建系统发育树。根据韦继光(2005)界定的标准,基于形态特征与系统发育树,本文认为,PI-1和PII-3两菌株虽形态上存在差异,但均同属于异色拟盘多毛孢(Pestalotiopsis versicolor)。
(3)PI-1和PII-3两菌株生物学特性测定结果表明,温度对两菌株营养生长的影响基本一致,生长温度范围均为10~32℃,最适均为25℃。但温度对两菌株产孢的影响存在差异,PI-1产孢温度范围为15~32℃,最适28℃:而PII-3产孢温度范围为15~30℃,最适20℃。温度对两菌株孢子萌发的影响基本相同,萌发温度范围均为10~35℃;最适均为25~28℃,12小时后萌发率几乎为100%。
pH值对两菌株营养生长的影响基本相似,生长的pH值范围均为3.0~10.9,最适均为pH4.0。pH值对两菌株产孢的影响存在差异,两菌株产孢pH值范围虽均为3.0~10.0,但产孢的适宜pH值差别较大,PI-1产孢最适pH为5.1,而PII-3为pH9.0。pH值对两菌株孢子萌发的影响相似,孢子萌发范围均为pH2.5~8.0,最适为pH3.0。
光照对PI-1和PII-3菌株的营养生长、产孢量及孢子萌发有不同的影响,其中PI-1菌株的营养生长和产孢特性对光照不敏感,但其孢子萌发对光照敏感,孢子萌发率在24h/d黑暗条件下显著高于在24 h/d光照条件下。对于PII-3菌株,24 h/d完全黑暗明显有利于其营养生长,24 h/d光照明显有利于其产孢,但不同光照处理对其孢子萌发的影响不显著。
培养基及不同碳氮源对菌株PI-1和PII-3营养生长和产孢影响测定结果表明,两菌株均能在供试的8种培养基上生长,含有红树植物浸出液的培养基更有利于两菌株的营养生长。除柠檬酸三钠之外,两菌株均能利用其余供试的碳氮源。其中,PI-1菌株营养生长的最佳碳源为甘露醇,最佳氮源为浓缩酵母浸出粉;产孢的最佳碳源为葡萄糖或蔗糖,最佳氮源为硝酸铵或天门冬酰氨。而PII-3菌株营养生长的最佳碳源为甘露醇,最佳氮源为硝酸钠;产孢最佳碳源为麦芽糖,最佳氮源为硝酸铵。