目的:　　 1、本研究通过直接测序的方法检测温州地区甲状腺肿瘤患者线粒体DNAcomplexⅠ变异发生情况。　　 2、分析线粒体DNA complexⅠ突变与甲状腺肿瘤的相关性及其在甲状腺肿瘤发生发展中的作用。　　 方法:　　 1、标本采集:选取2008年9月至2009年7月期间在温州医学院附属第一医院就诊的甲状腺肿瘤患者80例,包括甲状腺恶性肿瘤60例(甲状腺乳头状癌59例和甲状腺滤泡状癌1例)和甲状腺良性肿瘤20例(其中有1例石蜡病理论断为腺瘤型结节性甲状腺肿,其它19例为甲状腺腺瘤)。采集所选患者经苏木素-伊红(HE)染色的5μm手术冰冻病理切片3张,同时采集患者的外周静脉血标本及其临床资料。　　 2、DNA提取:光学显微镜下观察病理冰冻组织切片,区分肿瘤组织和肿瘤旁正常组织。用试剂盒法提取血液标本的全基因组DNA,蛋白酶K法提取肿瘤组织和肿瘤旁组织的全基因组DNA。　　 3、PCR扩增:设计11对互相交叉的引物对线粒体DNA complexⅠ进行PCR扩增,PCR产物直接进行测序。　　 4、数据分析:以患者自身的外周静脉血序列为对照,应用软件Codoncode Aligner对测序结果进行线粒体DNA complexⅠ变异情况分析。进一步分析氨基酸改变并运用生物软件进行保守性分析,借助蛋白质数据库对二级结构进行预测,探讨complexⅠ突变致瘤的分子机制。　　 5、统计学分析:结合患者临床资料,通过统计学方法分析其与线粒体DNAcomplexⅠ突变的相关性,初步探讨线粒体DNA complexⅠ突变在甲状腺肿瘤发生发展中的作用。　　 结果:　　 1、本研究共检测到20个线粒体DNA complexⅠ突变,14个为同质性突变(70％),6个为异质性突变(30％),其中观察到2个突变位点从血液到肿瘤旁组织,再到肿瘤组织异质率变化,即由野生型向突变型的转变过程。　　 2、本研究在60例恶性肿瘤患者中的17例检测到突变(突变率为28.33％),在20例良性肿瘤患者中的2例检测到突变(突变率为10％),对恶性肿瘤组和良性肿瘤组两组突变率进行统计学分析,结果无统计学差异(P值>0.05)。　　 3、在20个突变位点中,2个(包括G3842A和G4974A)为无义突变,5个为移码突变,13个为错义突变。错义突变中7个引起氨基酸极性改变,且多位于进化上保守的位置,对二级结构进行预测,发现C13250T引起了其编码多肽二级结构的改变,对无义突变和移码突变的二级结构进行预测,发现也引起了多肽二级结构的改变。　　 4、检测到的突变位点在complexⅠ的分布情况为ND1基因4个、ND2基因2个、ND3基因1个、ND4L基因1个、ND4基因6个、ND5基因5个、ND6基因1个。碱基改变情况,2个为碱基颠换(包括T-G和C-A颠换各1个),13个为碱基转换(包括G-A转换8个,T-C转换4个,C-T转换1个)。　　 5、在complexⅠ上共发现203个多态性位点,其中197个位点(97.04％)为碱基之间的转换(包括55个A-G,50个G-A,43个T-C,49个C-T),6个为碱基之间的颠换(包括3个C-A,1个T-A,1个T-G,1个G-C),其中有8个为未报道的。　　 6、线粒体DNA GomplexⅠ突变与甲状腺肿瘤患者的性别、年龄、家族史、肿瘤大小以及甲状腺功能指标(促甲状腺素、游离甲状腺素和游离三碘甲状腺原氨酸)均无统计学意义(所有p值均>0.05)。　　 结论:　　 1、在本研究发现的突变位点中,观察到2个突变位点从血液到肿瘤旁组织,再到肿瘤组织异质率变化,即由野生型向突变型的转变过程,以现有数据来看,可初步认为线粒体DNA突变参与甲状腺肿瘤的发生。　　 2、在本研究样本例数(包括60例恶性和20例良性甲状腺肿瘤)和地域(温州地区)范围内,线粒体DNA complexⅠ突变在恶性肿瘤组和良性肿瘤组两组间的突变率无统计学差异(p值>0.05),但检测到的错义突变C13250T、移码突变和无义突变二级结构预测能引起蛋白质结构的改变,推测其在甲状腺肿瘤的发生发展中起一定作用。　　 3、本研究范围内线粒体DNA complexⅠ突变与甲状腺肿瘤患者的性别、年龄、家族史、肿瘤大小以及甲状腺功能指标(促甲状腺素、游离甲状腺素和游离三碘甲状腺原氨酸)无相关性。