马钱苷、芍药苷对高糖培养大鼠雪旺细胞增殖及其NGF、IGF-1表达的影响

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目的:观察马钱苷、芍药苷对高糖培养大鼠雪旺细胞(Schwan cells,SCs)增殖及神经生长因子NGF、IGF-1表达的影响,从而探讨马钱苷、芍药苷治疗糖尿病周围神经病变可能的机制。方法:体外培养雪旺细胞,设立对照组,高糖模型组(50mMGlu),马钱苷组(5μg·mL-1、10μg·mL-1、20μg·mL-1、40μg·mL-1),芍药苷组(3μg·mL-1、6μg·mL-1、12μg·mL-1、24μg·mL-1)。以不同浓度的马钱苷和芍药苷作用高糖培养的雪旺细胞48h后,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)实验观察马钱苷和芍药苷在不同浓度下对雪旺细胞增殖的影响。采用逆转录-聚合酶链反应技术(RT-PCR)检测雪旺细胞NGF、IGF-1mRNA的表达。采用免疫细胞化学法检测雪旺细胞NGF、IGF-1蛋白的表达。结果:从MTT实验中观察到,高糖可抑制雪旺细胞的增殖(与对照组相比,P<0.05),而马钱苷(10μg·mL-1、20μg·mL-1、40μg·mL-1)和芍药苷(6μg·mL-1、12μg·mL-1、24μg·mL-1)均具有不同程度的促进高糖培养的雪旺细胞的增殖,从而对抗高糖环境对雪旺细胞增殖的抑制作用。从RT-PCR实验中观察到,高糖组雪旺细胞NGF、IGF-1mRNA表达较对照组明显减弱(P<0.05);马钱苷(5μg·mL-1、10μg·mL-1、20μg·mL-1、40μg·mL-1) NGF mRNA的表达与高糖组相比均有不同程度的升高,其中以20μg·mL-1最为显著(P<0.05);与高糖组相比,马钱苷(20μg·mL-1、40μg·mL-1)IGF-1mRNA的表达均有不同程度的升高(P<0.05),而马钱苷(5μg·mL-1、10μg·mL-1)IGF-1mRNA的表达无明显差异(P>0.05);与高糖组相比,芍药苷(6μg·mL-1、12μg·mL-1、24μg·mL-1) NGF mRNA、IGF-1mRNA的表达均有不同程度的升高,其中以12μg·mL-1芍药苷NGF mRNA.IGF-1mRNA的表达最显著(P<0.05),而3μg·mL-1芍药苷NGF mRNA、IGF-1mRNA的表达无明显差异(P>0.05)。从细胞免疫化学实验中观察到,对照组NGF、IGF-1阳性表达主要见于胞浆区。高糖组NGF、IGF-1阳性表达较对照组明显降低。与高糖组相比,马钱苷(5μg·mL-1、10μg·mL-1、20μmL-1、40μg·mL-1)NGF、IGF-1阳性表达均有不同程度的增高,其中马钱苷(20μg·mL40μg·mL-1)NGF、IGF-1阳性表达最明显(P<0.05)。与高糖组相比,芍药苷(12μg·mL-1、24μg·mL-1)NGF.IGF-1阳性表达增高(P<0.05),而芍药苷(3μg·mL-1、6μg·mL-1)NGF、IGF-1阳性表达不明显(P>0.05)。结论:1.高糖对雪旺细胞的增殖有明显抑制作用,且随着葡萄糖浓度的增高,抑制越明显。2.高糖使雪旺细胞下调NGF、IGF-1基因与蛋白的表达,分泌NGF、IGF-1的能力明显降低。3.马钱苷、芍药苷通过有效促进高糖培养的雪旺细胞的增殖能力、上调NGF、IGF-1基因与蛋白的表达、增加雪旺细胞NGF、IGF-1的分泌水平,从而保护和改善周围神经的形态和功能,促进神经损伤的修复,是其治疗糖尿病周围神经病变的可能机制。
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