荷叶碱（Nuciferine,NF）是一种提取自荷叶的异喹啉生物碱,研究表明荷叶碱能够有效改善血脂,是一种具有开发潜力的降脂类成分。目前的研究认为荷叶碱通过改变代谢相关基因的表达减轻高脂饮食（High fat diet,HFD）喂养引起的损伤,但有效剂量和口服吸收利用度低,口服后进入体循环的荷叶碱含量低,这种低入血量会影响药物的药效,而在较低的剂量（10和15 mg/kg/d）下荷叶碱仍能具有较好的降糖减脂作用,据此推测目前报道的荷叶碱的作用机理并不全面,荷叶碱可能不仅限于通过代谢相关基因产生药效。参考现有文献推测肠道菌群可能是其作用位点。为探讨肠道菌群在荷叶碱抗高脂血症中的作用,探究与其降脂作用相关的关键细菌靶点,初步阐明荷叶碱与肠道菌群相关的降血脂机制,课题开展了以下研究内容。第一部分:本章通过建立HFD诱导的高血脂模型和抗生素（Antibiotics,Abs）诱导的伪无菌小鼠模型初步验证了荷叶碱的降脂作用与肠道菌群有关。该部分首先建立HFD诱导的C57BL/6J小鼠高脂血症模型,以辛伐他汀（2.6 mg/kg）作为阳性对照药物,同时口服给予荷叶碱（7.5、15和30 mg/kg）和HFD喂养,检测血脂、口服糖耐量和肝脂等指标。并设置抗生素组（200 mg/kg/d氨苄青霉素,200 mg/kg/d诺氟沙星）及抗生素+荷叶碱组（15 mg/kg）建立伪无菌小鼠模型,通过对以上指标的比较,确定肠道微生物对荷叶碱产生抗高脂血症作用的影响。同时该部分还检测了脂代谢相关基因转录水平的变化。发现与模型组相比,荷叶碱引起血清TC、TG和肝脂的下降,荷叶碱在不同剂量下均表现出显著的抗高脂血症和减轻肝脂质累积的作用。当与抗生素合用时,荷叶碱的这种有益作用基本上被消除,表现为荷叶碱降低血脂和肝脂的作用消失或者减弱。与HFD组相比,荷叶碱显著增加了pgc1α的转录水平。在伪无菌小鼠中,基因转录水平的变化复杂,推测除了代谢基因有其他影响药效的因素。第二部分:该章节采用基因组技术,发现荷叶碱的降脂作用与肠道菌群有关,Akkermansia菌可能是关键的作用位点。采用全宏基因组测序,使用条形码引物对16S rRNAV4-V5区域进行扩增,检测粪菌组成,以此表征药物对微生物多样性、群落和物种组成的影响。宏基因组分析表明,与模型组相比,荷叶碱显著改变了肠道微生物菌群的结构,Akkermansia菌和Bacteroides菌含量上升,Lactobacillus菌含量下降。伪无菌小鼠中Akkermansia菌消失,Lactobacillus菌含量下降,Bacteroides菌含量上升。结合药效分析,荷叶碱的治疗效果与肠道菌群密切相关,其药效可能与Akkermansia muciniphila的富集相关。第三部分:该章节通过病理切片进行观察,发现荷叶碱改善了结肠杯状细胞数量。Akkermansia菌与结肠上皮组织和黏液层结构有影响,本文对小鼠结肠进行HE染色和AB-PAS染色,观察其结构变化,补充荷叶碱的药效及作用机制。小鼠结肠切片研究发现,与空白组相比,HFD虽然并未引起结肠组织结构的显著损伤,但是却减少了杯状细胞数量。与模型组相比,荷叶碱可以恢复HFD引起的杯状细胞数量减少。第四部分:该部分采用粪菌（Fecal microbiome,fe）移植技术,试图验证菌群在荷叶碱降脂作用中的关键地位。建立供体小鼠动物模型（空白组:生理盐水;模型组:HFD+生理盐水;荷叶碱组:HFD+NF 15mg/kg/d）以及受体小鼠模型（HFDfe组、HFD+NFfe组和HFD+NFfe灭菌组均给予抗生素混合液处理3 d,高脂饲料喂养,同时每天对各组小鼠进行粪菌移植培养或给予对照溶液。HFDfe组小鼠每天给予模型组小鼠的粪菌悬液,HFD+NFfe组小鼠同时每只给予供体0.2 mL小鼠的粪菌悬液,HFD+NFfe灭菌组小鼠给予等量巴氏杀菌后的菌液）,通过将供体小鼠的粪菌移植给受体小鼠,并考察血脂和肝脂,探究肠道菌群的改变对小鼠血脂的影响。但粪菌移植实验中供体小鼠和受体小鼠脂质水平呈现异常,并未成功验证肠道菌群在荷叶碱治疗中的关键作用。该研究建立了 HFD诱导的高血脂模型和Abs诱导的伪无菌小鼠模型,发现肠道菌群在荷叶碱抗高脂血症作用中起重要作用。采用基因组技术对其肠道菌群进行检测,发现荷叶碱能够改善菌群结构,而Akkermansiamuciniphila的富集可能是荷叶碱发挥其治疗作用的关键机制。通过病理切片进行观察,荷叶碱还能够改善小鼠结肠杯状细胞的数量。