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卵透明带是当今生殖研究中的一个热点,但天然卵透明带的来源稀缺影响了对它的研究和应用。分子生物学研究者利用基因工程技术重组人卵透明带蛋白及其肽段,以期为生殖研究带来新的前景。本研究通过两方面的实验——顶体诱发实验以及精卵结合实验来测试重组人卵透明带蛋白3(Recombinant Zona Pellucida Protein-3,rhZP3)的生物活性,为以后的抗生育和不育诊断试剂研究提供初步依据。 分别用空白培养液,含孕酮的培养液以及含有不同浓度的rhZP3的培养液对人精子进行顶体诱发实验,并且用考马斯亮蓝染色法对顶体状态进行评价。精卵结合实验分两部分进行:用不同浓度的rhZP3以及空白培养液分别处理同一份精子,然后再与卵子进行结合实验,观察经过不同处理的精子在精卵结合中的情况;另一方面,用分离提纯的rhZP3免疫新西兰大白兔,制备抗血清,用不同浓度的rhZP3抗血清与阴性血清分别处理来源相同的卵子,再各自与同一份精子进行结合实验,观察经过不同处理后的卵子在精卵结合中的情况。由于人卵来源的限制,本研究采用了小鼠作为辅助研究模型来探讨rhZP3对精卵结合的影响。同时利用免疫组织化学技术,用正常人卵巢切片与rhZP3抗血清进行反应,观察rhZP3抗血清对卵巢的影响。 研究结果表明,在rhZP3诱发顶体反应实验中,rhZP3处理组与空白对照组之间差异显著(P<0.05),而且项体发生率随rhZP3浓度的增加而升高。初步证实rhZP3能诱发人精子发生顶体反应,并且在一定浓度范围内顶体发生率与浓度成正相关。精卵结合实验结果显示各实验组和对照组之间存在显著性差异(P<0.05)。rhZP3和rhZP3抗体能够在一定浓度内抑制人和小鼠的精卵结合,且这种抑制程度是随着浓度的增大而增加的。在同样的实验中,rhZP3以及抗rhZP3抗体对人类精卵结合的抑制明显大于对小鼠精卵结合的抑制。免疫组织化学结果显示,抗体与卵巢组织切片显示出弱阳性。 实验的结果可初步推断rhZP3具有天然卵透明带相似的活性,其抗血清与卵巢反应性很低,为以后发展不孕不育检测试剂和避孕疫苗提供了体外实验的证据。