TRAF6蛋白在LPS/TLR4介导的MyD88依赖型的信号通路中起核心的作用，目前已有报道TAK1作为TRAF6的下游底物，与TAB1/TAB2/TAB3形成复合物，进而激活NF-kB、MAPK信号通路，促进细胞炎症因子的释放。但是，随后有实验室利用最新基因敲除技术在小鼠或细胞水平敲掉TAK1、TAB1、TAB2，MEKK3等基因后，用LPS刺激诱导MyD88依赖型信号通路，发现对NF-kB和MAPK信号通路均没有影响。因此，在LPS诱导的LPS/TLR4/MyD88信号通路中，目前对TRAF6下游蛋白及连接NF-kB、MAPK信号通路的上游这一中间区域还有待挖掘并找到新型的介导分子。　　利用CRISPR-CAS9技术敲除RAW264.7细胞的TRAF6基因，我们发现LPS诱导的MyD88依赖型的NF-kB、MAPK信号通路被抑制，这说明了TRAF6对激活NF-kB、MAPK信号通路是必不可少的;同时，在我们得到TAK1-/-、MEKK3-/-、TAK1-/-MEKK3-/-细胞后，LPS诱导产生的NF-kB、MAPK信号通路的激活都不受到影响，这进一步验证了TAK1、MEKK3蛋白在LPS/TLR4/MyD88/TRAF6信号通路中不是必需的。　　在TRAF6-/-RAW264.7细胞里面回补带有3*flag标签的TRAF6质粒，得到稳定表达细胞株，结合Western Blotting技术筛出表型与RAW264.7野生型一致的细胞株。我们通过免疫共沉淀方法，再借助质谱技术，找到了两个可能参与LPS/TLR4/MyD88/TRAF6信号通路新的介导分子，Nik和Rltpr。Nik又称丝裂原活化蛋白激酶3K14，目前报道它主要参与促进NFKB2/P100的蛋白水解而参与非经典途径NF-kB的激活;Rltpr蛋白，主要由富含亮氨酸重复序列，脯氨酸序列和类似原肌球调节蛋白序列构成，参与细胞骨架调节作用。我们同样利用CRISPR-CAS9技术，分别敲除野生型RAW264.7细胞的Nik和Rltpr基因，筛选出单克隆Nik-/-、Rltpr-/-细胞株，用LPS刺激诱导MyD88依赖型信号通路，发现NF-kB、MAPK信号通路不受影响，且表型与野生型没有明显区别，说明了这两个蛋白没有介导LPS/TLR4/MyD88/TRAF6信号通路下游NF-kB、 MAPK的激活。