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目的：建立同源基因mRNA表达水平同步定量的方法，探讨LDH同工酶的同源基因表达水平与蛋白亚基量和酶活性的关系。方法：Ⅰ.肿瘤细胞的培养和其总RNA的提取；Ⅱ.针对乳酸脱氢酶H、M亚基的高度同源序列位置设计一对引物，通过RT-PCR同时扩增乳酸脱氢酶的H、M亚基的cDNA；Ⅲ.使用SSCP技术分离同源片断；Ⅳ.使用Gel-Pro3.1(Media Cybernetics Inc, USA)凝胶图像分析软件计算同源片断的相对比率；Ⅴ.用涤纶膜做支持载体电泳测定肿瘤细胞内乳酸脱氢酶同工酶，计算其亚基比值；Ⅵ.考马斯亮蓝G-250染料结合法测定肿瘤细胞总蛋白质。结果：1、PCR反应的循环次数和模板浓度对LDH-M亚基cDNA在LDH总cDNA中所占比例影响不大；2、利用已知克分子浓度的LDH-M和LDH-H cDNA的扩增效率相同，建立了二者的直线性关系，并精确测量LDH-M mRNA 的比例；3、通过RT-PCR-SSCP所得的LDH-M亚基cDNA与LDH总cDNA水平的比值与同工酶的蛋白水平所测的比值是一致的。结论：本课题将RT-PCR与SSCP银染技术结合起来建立了定量检测同源基因mRNA表达水平的方法，并将该方法应用于肿瘤细胞中LDH同源基因的测定。该方法不但可行，还克服了常用的mRNA定量方法如内标准法扩增效率差异的问题等，而且还具有简单和高灵敏度的优点。可为进一步研究同源基因定量分析在临床诊断和科研中的其他应用打下基础。