IGF-1调控下染料木黄酮对睾酮诱导RWPE-1细胞增生的抑制作用研究

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[目的]通过研究染料木黄酮(genistein,Gen)和胰岛素样生长因子(insulin-like growth factor-1,IGF-1)对睾酮诱导增生的RWPE-1细胞的作用,观察在适宜浓度的IGF-1调控下,Gen对睾酮诱导的细胞增生的抑制作用及对细胞周期的影响,同时通过对细胞周期蛋白和细胞周期蛋白激酶的测定,初步探讨IGF-1调控下Gen对睾酮诱导的细胞增生抑制的分子作用机制。[方法]本实验采用睾酮溶液刺激人前列腺正常上皮细胞(RWPE-1Cells);MTT法测定IGF-1和Gen对睾酮诱导RWPE-1细胞增生的影响,观察在适宜浓度的IGF-1水平调控下,Gen对睾酮诱导RWPE-1细胞增生的抑制作用;采用流式细胞仪检测IGF-1和Gen对睾酮诱导增生的RWPE-1细胞周期的影响,采用Western-Blot实验检测IGF-1和Gen对异常增生的RWPE-1细胞周期蛋白CyclinB1、CyclinD1和细胞周期蛋白激酶CDK4的影响。[结果](1)MTT法比色结果,Gen能够抑制睾酮诱导的RWPE-1细胞增生,且随着浓度的增加,抑制作用加强,40.00μmol/L的Gen作用3天是较为适宜的作用浓度和作用时间;IGF-1能够促进RWPE-1细胞的增生,且随着浓度的增加,促进作用加强,而6.4nmol/L的IGF-1作用3天是较为适宜的作用浓度和作用时间;而在适宜浓度的IGF-1水平调控下,Gen的抑制率高于单独使用Gen的抑制率。(2)流式细胞仪结果,在适宜浓度的IGF-1水平调控下Gen对睾酮诱导增生的RWPE-1细胞的作用,使G1期细胞百分比较对照组减少,S期细胞百分比较对照组增加,G2/M期细胞百分比较对照组和单独的Gen组均增加。(3)Western-Blot实验结果,Gen上调CyclinB1的表达,下调CyclinD1、CDK4的表达;IGF-1上调CyclinB1、CyclinD1和CDK4的表达;在适宜浓度的IGF-1调控下,Gen上调CyclinB1的表达,下调CyclinD1、CDK4的表达。[结论](1)Gen能够抑制睾酮诱导RWPE-1细胞的增生,且呈浓度依赖趋势。在适宜浓度的IGF-1调控下,Gen对睾酮诱导RWPE-1细胞的抑制作用比单独使用Gen效果更明显。(2)Gen对睾酮诱导的RWPE-1细胞增生的抑制作用可能是由于其对细胞周期G2/M期的阻滞作用,且在IGF-1的调控下其阻滞作用更为明显。(3)Gen对睾酮诱导RWPE-1细胞增生的抑制作用可能与IGF-1影响Gen上调细胞周期蛋白CyclinB1的表达,下调CyclinD1和细胞周期蛋白激酶CDK4的表达有关。
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