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本文筛选了日本沼虾细胞培养的最适培养基:以M199(Gibco)为基础培养基,添加20%胎牛血清(FBS),青霉素100IU/mL,链霉素100μg/mL,1g/L葡萄糖,5.2g/LNaCl,1.43g/LCaCl2,0.05g/LMgCl2,0.2g/LNaHCO3。以此培养基对日本沼虾肌肉和肝胰腺进行了原代细胞培养,井将肌肉细胞传代3次。 实验中发现,幼虾比成虾的组织更易培养成活。另外细胞培养与季节和蜕皮周期有关,春季虾优于夏秋季虾;蜕皮后12小时内的沼虾比蜕皮间期沼虾的组织更易培养成活。本实验以春季第一批日本沼虾幼虾为实验材料,在沼虾蜕皮后12内进行接种,取得了较好的培养效果。肝胰腺细胞存活8-15天,肌肉细胞被传代3次,存活54天。 本文以RNA/DNA、总磷和无机磷含量为生理和生化指标,分别测定了几种不同渗透压(480、570、650mmol/kg)和pH值(6.8、7.2、7.6、8.0、8.4、8.8)条件下体外培养肌肉细胞的生长状况。指出570mmol/kg为培养细胞的最适渗透压,在此渗透压条件下。培养细胞的RNA/DNA最大,而总磷含量最小(P<0.05)。培养细胞的适宜pH范围是7.2-8.0,其最适pH为7.6,在此pH条件下,传代细胞的RNA/DNA和总磷含量均最大(P<0.05)。 在此基础上,本文研究了微量元素锌对体外培养肌肉细胞的影响,结果表明0-60μg/L Zn2+能促进传代肌肉细胞的生长,Zn2+60μg/L组的细胞生长最快,RNA/DNA值和总磷含量最大(P<0.05),这说明培养基中Zn2+浓度在60μg/L为宜。过量的Zn2+则表现出重金属的毒性作用。