λ-卡拉胶寡糖的降解特征及其生物活性研究

来源 :宁波大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:along365
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
λ-卡拉胶是一种硫酸基取代最多的,来源于海洋红藻的天然植物多糖,是由β(1→3)-D-半乳糖和α(1→4)-D-半乳糖形成的交替共聚物,在二糖单元的D2S,6S-G2S三个位点分别取代了三个硫酸基团,其取代量高达41%。λ-卡拉胶与哺乳动物体内酸性取代基团含量最多的一类多糖~硫酸乙酰肝素(HS)有很强的结构相似性,是外源性的类肝素化合物,其降解产物λ-卡拉胶寡糖具有抗肿瘤、抗病毒、抗凝血等作用。因此,λ-卡拉胶寡糖在从事糖类的生理和药理的应用方面具有极大的开发空间。但是λ-卡拉胶寡糖由于高硫酸基取代的不稳定性及缺乏酰胺基等基团,其分离和检测难度非常大,目前尚无相关报道。本研究首先以λ-卡拉胶为原料,采用卡拉胶降解菌(Pseudoalteromonas carrageenovora)对其进行降解,研究了不同条件下λ-卡拉胶的降解特征,获得了λ-卡拉胶寡糖混合物,并通过活性炭吸附和乙醇解吸附得到聚合度(dp)较小的寡糖混合物,利用聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)技术分析比较不同条件下λ-卡拉胶的降解和寡糖的含量变化,得到最适的λ-卡拉胶降解方法,建立了离子对-反相高效液相色谱-三重四级杆质谱(RPIP-HPLC-ESI-MS)联用系统快速分离鉴定λ-卡拉胶寡糖的方法。利用制备型HPLC制备获得了6种纯的λ-卡拉胶寡糖。最后,利用人脐静脉内皮细胞(human umbilical vein endothelial cells,HUVEC)为实验研究对象,将制备得到的几种λ-卡拉胶寡糖配成不同的浓度处理细胞,分别测定不同聚合度的λ-卡拉胶寡糖与两种蛋白质受体(碱性成纤维细胞生长因子bFGF和乙酰肝素酶)的互作情况。本文提出了利用卡拉胶降解菌对λ-卡拉胶进行特异性降解,通过优化降解条件,大大提高了λ-卡拉胶寡糖的分离度及检测灵敏性,当选用5mM庚胺乙酸盐水溶液(pH至5.5)(A)和5mM庚胺乙酸盐甲醇溶液(pH5.5)(B)作为梯度洗脱溶剂,λ-卡拉胶寡糖通过Hypersil GOLD C18反相色谱柱分离,在正离子模式下分离得到dp2-15的14种λ-卡拉胶寡糖,并进一步确定所得到寡糖的结构及序列信息,建立了λ-卡拉胶寡糖的结构分析方法,为硫酸寡糖的快速鉴定和结构解析提供了参考价值。制备得到的6种不同聚合度的λ-卡拉胶寡糖的生物活性实验表明,λ-卡拉胶寡糖的活性与其分子量大小具有重要的关系,较大聚合度的λ-7在和bFGF细胞因子的结合与抑制乙酰肝素酶活性方面均表现出较高的生物活性,为今后研究λ-卡拉胶寡糖的抗血管新生等方面具有重要的意义。
其他文献
电纺直写技术利用外加电场力拉伸喷射溶液产生射流喷射,利用射流稳定直线阶段实现有序微纳结构的喷印;并在有机微纳系统、柔性电子器件等领域显示了巨大的发展潜力。约束射流
随着经济的飞速发展,我国各个行业以及人们生活对电力的要求都有了极大的改变,为了满足国家的需求,电力行业实行了体制变革。其中,输配电价改革是改革中重点讨论的改革项目之
近年来,这些困难企业通过持续不断深化改革,激发了前所未有的活力,走出了一条从亏损到盈利的跳跃式发展之路。2018年是处僵治困攻坚战的决胜之年。在集团公司党组的坚强领导下,中
随着河北省的对外开放,越来越多的游客来到河北,他们需要借助于英语标识语出行生活,目前公共标识语翻译错误较多,亟待改进。公共标识语的翻译具有应用性,简练性和创新性的特
<正>中国政府和联合国开发计划署在北京联合召开中国21世纪议程高级国际圆桌会议期间,中国环境战略研究中心在斯堪的纳维亚大学出版社积极配合下,委托商务印书馆国际有限公司
为做好从浓度控制向总量控制过渡的准备,必须进行水污染源水量、水质的现场调查,确定水污染物的排放系数。从石油二厂主要生产装置的现场调查总结出一套进行水污染源现场调查
《开讲啦》成为众多电视节目中形式创新与传播主流价值相结合的节目典范,其嘉宾选取和传播内容贴近观众需求,其主流价值观的传播和传播效果彰显了电视媒体的文化功能和教育功
《拉帕其尼医生的女儿》的众多先期评论者认为拉帕其尼不啻为一个主宰者,他与其他人物的关系可被化约为静态的二元对立。但是从福柯权力理论出发可以阐释人物关系动态、非中
利用湖南省97个气象台观测站点34 a(1980~2013年)的逐日降水量数据,结合克里金插值法分析湖南省降水量时空分布,并通过线性回归法计算气候倾向率研究湖南省降水量变化趋势的