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晚期糖化终末产物(advanced glycation end products,AGEs)对人体健康的危害性受到越来越多人的关注,特别是AGEs与RAGE(receptor for AGEs)相互作用引起的慢性炎症反应。AGEs诱导的慢性炎症反应会提高人体创口修复过程中炎症反应强度,高强度的炎症反应会损伤人体创口修复功能。咖啡酸和绿原酸是自然界中广泛存在的邻苯二酚类化合物,具有很好的抗炎活性。本课题基于咖啡酸和绿原酸的天然活性功效,通过细胞实验和光谱学技术,考察咖啡酸和绿原酸对AGEs诱导的HUVEC炎症反应的抑制效果和作用机制,拓展了咖啡酸和绿原酸在创口修复领域的应用。本论文的主要内容及成果如下:(1)以HUVEC为研究对象,考察AGEs-BSA、咖啡酸、绿原酸的合理作用浓度范围,构建HUVEC炎症反应体系。该炎症反应体系是:200μg/mL的AGEs-BSA诱导HUVEC细胞产生炎症,以相同浓度BSA处理的HUVEC细胞作对照。添加10μM、20μM的咖啡酸和绿原酸,考察咖啡酸和绿原酸对AGEs-BSA诱导的HUVEC细胞炎症反应的影响。(2)从AGEs-RAGE相互作用激活的细胞信号通路出发,着重考察ICAM-1、VCAM-1、MCP-1、TNF-α、IL-1β炎症因子,研究了咖啡酸和绿原酸的抗炎功效。从RNA水平考察咖啡酸和绿原酸对HUVEC炎症基因表达量的影响,发现咖啡酸和绿原酸可以抑制由AGEs-BSA诱导的HUVEC细胞的ICAM-1、VCAM-1和MCP-1mRNA表达,咖啡酸对ICAM和MCP-1 mRNA表达的抑制效果强于绿原酸。在蛋白水平上考察咖啡酸和绿原酸对HUVEC细胞炎症因子表达量和AGEs-RAGE正反馈回路的影响,发现咖啡酸和绿原酸可以抑制由AGEs-BSA诱导的HUVEC细胞TNF-α和IL-1β蛋白质表达量升高,且咖啡酸对TNF-α和IL-1β的抑制效果强于绿原酸。另外,咖啡酸和绿原酸均能够阻断AGEs-RAGE的正反馈回路。咖啡酸对AGEs-BSA诱导的炎症反应的抑制效果强于绿原酸。通过Western blot考察咖啡酸和绿原酸对HUVEC细胞炎症调节通路的影响,发现咖啡酸和绿原酸可以抑制炎症信号通路ROS/p38MAPK/NF-κB相关激酶的表达,从而抑制AGEs-BSA诱导的HUVEC炎症反应。(3)通过荧光分光光谱法和紫外-可见光分光光度法考察AGEs-BSA与咖啡酸、BSA与咖啡酸的相互作用。通过Stern-Volmer方程和紫外-可见光分光光度法研究咖啡酸与AGEs-BSA、咖啡酸与BSA相互作用的淬灭机制,发现它们的相互作用机制都是静态淬灭机制。根据结合常数公式作线性回归,得到结合位点数n。发现,咖啡酸与AGEs-BSA、咖啡酸与BSA只有一个结合位点,是以1:1的摩尔比进行结合,而且咖啡酸与AGEs-BSA的结合能力大于咖啡酸与BSA的结合能力。AGEs-BSA与咖啡酸、BSA与咖啡酸相互作用的热力学参数表明,咖啡酸与AGEs-BSA、咖啡酸与BSA相互作用力类型主要是疏水相互作用力。通过同步荧光光谱法研究咖啡酸对AGEs-BSA、BSA构象的影响,发现咖啡酸对AGEs-BSA、BSA中酪氨酸与色氨酸残基周围微环境的影响很小。(4)探讨了咖啡酸和绿原酸对AGEs-BSA诱导的炎症作用机制。咖啡酸和绿原酸可以通过细胞内机制(AGEs-RAGE/ROS/MAPK/NF-κB信号通路)抑制AGEs-BSA诱导的炎症反应。另外,在这个过程中可能还有细胞外机制的参与,即咖啡酸和绿原酸与AGEs-BSA的疏水相互作用、咖啡酸和绿原酸被氧化成为相应的醌,捕获CML,导致AGEs-BSA所带电荷发生变化,进而影响AGEs与RAGE的相互作用。本论文拓展了咖啡酸和绿原酸在抗炎领域的应用,为咖啡酸和绿原酸抑制由AGEs-BSA诱导的炎症反应提供理论支撑,较好地促进了咖啡酸和绿原酸在创口修复领域的应用。