【摘 要】
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目的:运用一株胃癌细胞AGS,将其分为shCtrl(对照组)及shHEATR1(目标组),运用细胞功能学实验检测HEATR-1(HEATR repeat containing-1)基因对于肿瘤细胞增殖的相关作用,当其在
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目的:运用一株胃癌细胞AGS,将其分为shCtrl(对照组)及shHEATR1(目标组),运用细胞功能学实验检测HEATR-1(HEATR repeat containing-1)基因对于肿瘤细胞增殖的相关作用,当其在慢病毒感染并敲除目的基因后,观察正常两组之间的细胞增殖是否受到抑制。方法:根据在基因库中检索HEATR-1的mRNA核苷酸序列,设计、目的基因慢病毒载体构建。培养生长状态良好的目的细胞,依据相关要求设计好实验条件后进行病毒感染。依据预实验确定的感染时间点,在一定荧光条件下显微观察GFP表达水平,细胞汇合度达80%左右收集细胞进入下游实验。经聚合酶链式反应检测胃癌细胞株AGS目的基因表示水平,确定高表达后,在慢病毒感染目标组之后行Q-PCR检测HEATR-1的mRNA表达水平确认敲除效率。并对shCtrl(对照组)及shHEATR1(目标组)行MTT检测,评估HEATR-1敲除后对细胞增殖功能的影响,探讨HEATR-1阳性表达与胃癌组织增殖的关系。结果:对照及目的慢病毒感染目的细胞后72小时于显微镜下荧光观察,观察结果显示细胞感染效率达到80%以上细胞状态正常。荧光定量PCR检测基因敲减HEATR1基因shCtrl和shHEATR1(shCtrlΔCt均值=6.48,shHEATR1ΔCt均值=9.73,表达丰度分别为1.000±0.014、0.105±0.005);经成对T检验,P<0.05;选取增殖期细胞外源性MTT,还原成难溶于水的蓝紫色针状Formazan结晶并沉淀在细胞中,MTT检测结果表明:相比shCtrl组,shHEATR1组细胞day5增殖减缓(P<0.05)。综合上述实验结果,证实干扰目的基因HEATR1对胃癌细胞AGS有抑制其增殖的作用结论:干扰目的基因HEATR1对胃癌细胞AGS有抑制其增殖的作用。
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