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水稻白叶枯病(Rice Bacterial Blight,BB)是水稻生产上危害最大的细菌性病害之一,广泛分布于各水稻种植区,并造成水稻不同程度的减产。多年生产实践表明,培育抗病品种是克服白叶枯病最有效的途径。通过构建突变体的策略来研究未知功能基因是一种有效的途径。本研究利用经EMS化学诱变携带显性Xa13基因启动子驱动绿色荧光蛋白(GFP)基因的水稻转基因种质IRBB13(Pxa13:GFP)为实验材料,构建突变群体,分三个不同时期进行突变体筛选:幼苗期通过体视荧光显微镜筛选根和芽中绿色荧光减弱或消失的突变体;成株期接种水稻白叶枯病菌菲律宾菌系6号生理小种PXO99筛选回复感病表型的突变体;孕穗期筛选育性下降的突变体并观察花粉中GFP的表达情况。
通过镜检共检测突变体3000个M2代株系,筛到幼根和幼芽荧光消失的突变体株系14个,根部荧光正常芽无荧光的突变体9个。田间成株期接种鉴定3000个M2代株系,筛到回复感病突变体株系25个;孕穗期筛到育性下降且花药中绿色荧光消失的突变体株系7个,其中包括1个回复感病的突变体株系1个。这些突变体的获得将为克隆水稻白叶枯病抗病相关基因的研究及明确基因调控的信号网络途径奠定基础。
另外,本实验中每条染色体上选取了5对均匀分布的SSR标记,分别以水稻品种IRBB13(Pxa13:GFP)和Long grain基因组DNA为模板进行PCR扩增,扩增产物经过毛细管电泳检测。最终得到具有多态性的分子标记21对,其中共显性标记11对,完全显性标记10对,这些多态性标记的获得为突变体基因的定位奠定了基础。