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目的:研究可溶性CD40配体(soluble CD40 ligand,sCD40L)对非霍奇金淋巴瘤Raji细胞增殖凋亡以及研究MAPK通路上信号因子RAS/RAF/MEK/ERK的影响,为sCD40L能否应用于人Burkitt淋巴瘤治疗提供更多的实验和理论依据。方法:1.常规培养Raji细胞;取对数生长期的细胞以浓度梯度0.25μg/mL,0.5μg/mL,1μg/mL,2μg/mL,4μg/mL分别处理24h,48h,72h后,加入CCK8溶液检测细胞活力情况,确定细胞增殖的变化,以了解sCD40L对Raji细胞的相关生物学影响CCK-8法检测sCD40L对其的增殖的影响。2.采用AnnexinV-FITC/PI双染法检测sCD40L对Raji细胞凋亡的影响;3.流式细胞术检测sCD40L对Raji细胞周期的影响;4.使用实时荧光定量PCR法检测反映sCD40L对Raji细胞中ras、raf、MEK、ERK1/2mRNA表达的影响。结果:1.不同浓度sCD40L对Raji细胞作用24 h、48 h、72 h小时后均有不同程度的抑制作用,与对照组相比较,均有显著差异(P<0.05)。本实验中以sCD40L的最大浓度为4μg/mL对Raji细胞抑制作用最明显;同一浓度、不同作用时间下,72 h抑制作用最明显。2.AnnexinV-FITC/PI双染法显示,Raji细胞与浓度为4μg/mL的sCD40L作用24 h、48 h、72 h,Raji细胞的凋亡率逐渐增高,且72 h凋亡率最高,与24 h、48 h相比具有统计学意义(P﹤0.05)。提示sCD40L可诱导Raji细胞的凋亡,随着sCD40L作用时间延长,对Raji细胞凋亡率逐渐增高。3.流式细胞术检测细胞周期显示,用浓度为4μg/mL的sCD40L处理24h、48h后,Raji细胞G0/G1期的细胞比例增加,与S、G2/M相比有差异(P<0.05),提示可能细胞被阻滞在G0/G1期。4.实时荧光定量PCR检测结果显示,以浓度为4μg/mL的sCD40L与Raji细胞分别共育24 h、48 h、72 h后,ras mRNA在48 h、72 h表达量降低,后者与同时间对照组比较有差异(P<0.05);raf mRNA在72 h表达量降低,与同时间对照组比较无统计学意义(P(29)0.05);MEK mRNA在48 h及表达量降低,与同时间对照组比较无统计学有差异(P(29)0.05);ERK mRNA在72 h表达量降低,与同时间对照组比较有差异((49)<0.05),但各基因在除上述时间以外的其他时间点表达量均高于相应对照组,统计学比较结果不一致。以上结果显示,随着时间变化,各基因表达结果存在差异但无规律性,因而暂时无法验证sCD40L作用Raji细胞后,不能确定是否与MAPK通路有关。结论:1.sCD40L在体外可抑制Raji细胞增殖并促进其凋亡,本实验结果显示当sCD40L浓度为4ug/ml,作用时间在72 h时上述效果最明显。2.sCD40L在体外将Raji细胞阻滞在G0/G1期。3.sCD40L作用Raji细胞不同时间后的MAPK通路相关因子ras、raf、MEK、ERK mRNA表达量结果有一定差异,但尚不能说明是通过抑制MAPK通路有关。