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目的观察伤寒经典方抵当汤和小陷胸汤合方(以下简称抵当陷胸汤)所蕴含的痰瘀同治法对糖尿病心肌病大鼠AGEs-RAGE轴所引起的心肌组织的微血管、心肌纤维化及细胞外机制等病变的影响。探讨“搜剔络道痰瘀同治”治法对糖尿病心肌病变的干预机制与AGEs-RAGE轴所调控的信号通路引起的的心肌病变之间的关系。试图证明“搜剔络道痰瘀同治”治法对糖尿病心肌病变的影响与AGEs-RAGE轴的活化密切相关,为临床防治糖尿病心肌病寻找客观实验依据,为经方的开发应用奠定了基础。方法120只体质量为220±20g的健康雄性SD大鼠,适应性喂养7天后,将其随机分成两组,其中一组为10只作为空白对照组(NC);另一组为110只,用于造模,复制糖尿病(DM)模型。将待造模的110只SD大鼠,禁食24h,但不禁水,按照55mg/kg的剂量进行单次腹腔注射链脲佐菌素(Streptozotocin,STZ)溶液,最终共有90只大鼠符合糖尿病心肌病模型。再将造模成功的大鼠随机分为:模型组(MC)、痰瘀同治组(RPDBS)、AGEs特异性蛋白交联抑制剂组(ALT-711)、化痰组(RP)、化瘀组(DBS),每组18只。给药方法:NC组和MC组均按1.0ml/(100g·d)蒸馏水灌胃;RPDBS组、RP组和DBS组按照人鼠的换算系数计算,分别按剂量4.05、7.02、8.10g/(kg·d)给予相应的汤剂灌胃;ALT-711组:按0.3mg/(100g·d)灌胃(现用现配)。每日灌胃时间固定,持续8周。于第8周末,进行腹腔注射3%戊苯巴比妥钠(30mg/kg)麻醉,麻醉后快速取材。1痰瘀同治法对AGEs-RAGE轴活化的影响:(1)实时荧光定量PCR和Western blot法检测RAGE的表达;(2)实时荧光定量PCR和Western blot法检测PPARγ的表达。2痰瘀同治法对由AGEs-RAGE轴导致的DCM大鼠心肌微血管病变的影响:(1)实时荧光定量PCR检测心肌组织中c-jun基因的表达;(2)Western blot法检测心肌组织中p-JAK1、p-STAT1蛋白的表达。3痰瘀同治法对由AGEs-RAGE轴导致的DCM大鼠心肌细胞外瘀阻性病变的影响:(1)Western blot法检测心肌组织中TGF-β1蛋白的表达;(2)酶联免疫吸附剂法检测心肌组织中ROS的表达;(3)采用免疫组化法测定心肌Ⅰ型和III型胶原蛋白表达情况。结果实验过程中因死亡及其他原因剔除22只SD大鼠,与MC组比较,各用药组的一般情况均有不同程度的改善,其中ALT-711组及RPDBS组改善最为明显。1(1)实时荧光定量PCR和Western blot法检测RAGE的表达:与NC组比较,MC组心肌组织中RAGE的蛋白和基因表达均显著性上调(p<0.01),各用药组与MC组比较,心肌组织RAGE的蛋白和基因表达均下调,差异显著(p<0.01),各用药组组间比较发现,RPDBS组的RAGE基因、蛋白表达水平均较RP组和DBS组显著性下调(p<0.01);(2)实时荧光定量PCR和Western blot法检测PPARγ的表达:MC组心肌组织中PPARγ的基因和蛋白表达水平较NC组,显著性降低(p<0.01),与MC组比较,各用药组PPARγ基因和蛋白的表达水平均升高(p<0.01,p<0.05),其表达水平由高到低的顺序:ALT-711组>RPDBS组>RP组>DBS组。2(1)Western blot法检测心肌组织中p-JAK1、p-STAT1蛋白的表达:MC组与NC组比较,心肌组织中p-JAK1、p-STAT1蛋白的表达水平降低,有显著性差异(p<0.01),与MC组比较,各用药组心肌组织中p-JAK1、p-STAT1蛋白的表达水平明显降低(p<0.01),各用药组组间比较发现,RPDBS组较RP组和DBS组p-JAK1、p-STAT1蛋白的表达水平下降显著(p<0.01),但不及ALT-711组(p<0.01);(2)实时荧光定量PCR检测c-jun基因的表达:与NC组比较,MC组心肌组织中c-jun基因的表达水平明显上调(p<0.01),各用药组与MC组比较,c-jun基因的表达水平明显下调(p<0.05,p<0.01),组间比较发现RPDBS组较RP组和DBS组c-jun基因的表达水平下调更明显(p<0.01),而ALT-711组优于RPDBS组(p<0.05)。3(1)Western blot法检测心肌组织中TGF-β1蛋白的表达:MC组较NC组,心肌组织中TGF-β1的蛋白表达水平明显升高(p<0.01),各用药组与MC组比较,TGF-β1的蛋白表达水平明显下降(p<0.01),组间比较发现,ALT-711组较RPDBS组下调更显著(p<0.01),而RPDBS组的下降较RP组和DBS组明显(p<0.05);(2)酶联免疫吸附剂法检测心肌组织中ROS的表达:与NC组比较,MC组心肌组织中ROS的含量显著性升高(p<0.01),各用药组与MC组比较,心肌组织中ROS的含量显著性降低(p<0.01),各用药组ROS含量由低到高的顺序为:ALT-711组0.05)。结论1具有“搜剔络道痰瘀同治”作用的经方合方抵当陷胸汤能够明显改善DCM模型大鼠的一般状况(包括精神状态、毛发状况、尾部皮损程度等),与ALT-711组效果相当,说明中药在防治DCM大鼠的心肌病变方面具有一定优势。2具有“搜剔络道痰瘀同治”的合方抵当陷胸汤对DCM微血管病变、细胞外瘀阻性病变、纤维化病变等的干预机制与AGEs-RAGE轴的活化及调控有关。3中药组中具有“搜剔络道痰瘀同治”的合方抵当陷胸汤对DCM大鼠的治疗效果显著优于单纯“活血化瘀”的血府逐瘀汤和“清热化痰散结”的小陷胸汤,表明了合方的配伍治疗效果更好。