论文部分内容阅读
(一)黄斑变性1号方治疗渗出型年龄相关性黄斑变性的临床观察研究目的:观察黄斑变性1号方(Huangban Bianxing One Decoction,HBOD)联合雷珠单抗治疗渗出型年龄相关性黄斑变性(aged-related macular degeneration,AMD)患者的有效性和安全性。方法:从2014年7月至2016年2月,共75例符合纳入标准和排除标准的渗出型AMD患者(75只眼)入选本次研究,随机分为治疗组和对照组,两组均在入组后给予雷珠单抗治疗1次。在此基础上,治疗组每天口服HB0D水煎剂,1天2次,每次100mL,疗程持续6个月。作为主要结果,评估治疗前后的早期治疗糖尿病视网膜病变研究(early treatment diabetic retinopathy study,ETDRS)字母数的最佳矫正视力、黄斑中心凹厚度(center macular thickness,CMT)、病变高度、眼底出血面积、眼底荧光渗漏面积。结果:经过3个月的治疗,两组的ETDRS字母数都获得了较大改善(P<0.05)。治疗6个月后,治疗组的ETDRS字母数明显提高(P<0.01),且明显优于对照组(P<0.05)。治疗3个月后,两组相比于治疗前CMT和病变高度也明显降低(P<0.01或P<0.05),治疗6个月后,治疗组相比治疗前CMT和病变高度也明显降低(P<0.01)。治疗6个月后,出血面积和荧光素渗漏面积也明显缩小(P<0.01或P<0.05),且与对照组比较,治疗后的出血面积和荧光渗漏面积减小明显优于对照组(P<0.01或P<0.05)。治疗期间,也未有明确与治疗有关的重大不良事件。结论:渗出型AMD属于新生血管性视网膜病变,是世界老年人口失明的主要原因之一。在本研究结果的基础上,HBOD可以辅助改善视力,并减少渗出型AMD患者的出血和荧光素渗漏,减少抗VEGF药物注射次数,这可能是渗出型AMD有效的辅助和安全治疗方法。(二)黄斑变性1号方治疗渗出型年龄相关性黄斑变性的机制研究目的:围绕白细胞介素(interleukin,IL)-17信号调控通路,探讨中药复方HBOD对渗出型AMD患者血浆中IL-17、血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)-A表达水平的影响。方法:2014年7月至2016年2月,纳入临床观察研究中治疗组的38例渗出型AMD患者。治疗前和服用中药复方HBOD 6个月后患者于清晨空腹抽取静脉血,分别作为AMD组和治疗组,并招募20例健康者作为对照组。并用酶联免疫吸附测定法测定血浆中IL-17A、VEGF-A 表达水平。结果:本次研究中,IL-17A在对照组中仅有1例可测出,AMD组中有6例,治疗组中有3例,因而无法做统计学差异比较。AMD组血浆中的VEGF-A水平明显高于治疗组和对照组(P＜0.01或P<0.05),治疗后与对照组比较无显著性差异(P>0.05)。结论:HB0D可以调节渗出型AMD患者血浆中的VEGF-A的水平,但HBOD是否能影响IL-17A的水平还有待进一步研究。(三)黄斑变性1号方治疗渗出型年龄相关性黄斑变性的血浆代谢组学研究目的:AMD是具有高发病率和复杂发病机制的主要失明疾病。我们的目的是研究中药复方HBOD治疗渗出型AMD患者血浆代谢组学特征。方法:这项代谢组学研究是通过分析20例健康对照者和20例渗出型AMD患者接受HBOD治疗前与治疗6个月后的的血浆进行的。我们使用超高压液相色谱和四极杆飞行时间质谱法进行分析。这些差异与AMD病理生理和治疗的关系也得到了确定。剩余数据通过Pareto scaling进行归一化,然后通过使用MetaboAnalysis软件的多变量数据分析处理有效数据,包括无监督主成分分析(principal component analysis,PCA)和监督偏最小二乘法分析(partial least squares-discriminate analysis,PLS-DA)。目的是确定分析的重要代谢物。进行分层聚类,以区分组间的代谢物。然后使用建立的数据库鉴定重要的代谢物,并将其进行京都基因和基因组百科全书(Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes,KEGG)代谢通路分析。结果:PCA、PLS-DA和分层聚类结果分析显示,渗出型AMD治疗前后血浆代谢状态无明显变化。在正离子模式下,检测到总共5443个离子峰,其中包括一些氨基酸、异麦芽糖、氢化可的松和胆红素10种代谢物在渗出型AMD和健康对照之间有显著不同。氨基酸生物合成的代谢通路在渗出型AMD患者和对照者间有显著差异。结论:这些研究结果表明,渗出型AMD和对照之间的代谢特征不同,并且可能为AMD指导的治疗和诊断提供有希望的新目标。同时,因建立的模型可靠性较差,尚未发现HBOD可以显著调节渗出型AMD患者的代谢状态。(四)黄斑变性1号方及其主要成分干预IL-17A刺激ARPE-19细胞分泌促炎因子研究目的:本研究旨在探讨中药复方HBOD及其主要成分对IL-17A在人视网膜上皮细胞ARPE-19细胞中诱导促炎细胞因子产生的影响。方法：将 ARPE-19 细胞与 100ng/mL IL-17A 孵育 6、12、24 或 36h,以及与 10、20、50、100或200ng/mL IL-17A孵育6h,通过定量实时聚合酶链反应(quantitative real-time polymerase chain reaction,qRT-PCR)以测定IL-1 β、IL-6、IL-8、趋化因子(C-C 形)配体(chemokine(C-Cmotif)ligands,CCLs)CCL2 和 CCL20mRNA 的表达。进行细胞增殖-毒性检测试剂盒(Cell Counting Kit,CCK-8)测定以确定HB0D、黄芪多糖(astragalus polysacharin,APS),三七总皂甙(panax notoginseng saponins,PNS)和贝母素甲(peimine,PE)的细胞毒性。ARPE-19细胞用非细胞毒性药物溶液预处理2h,然后给与或不与人重组IL-17A孵育6h或24h。分别通过qRT-PCR和酶联免疫吸附测定法测定所得的促炎细胞因子mRNA和蛋白表达水平。结果:IL-17A 可显著增加 ARPE-19 细胞中的 IL-1 β、IL-6、IL-8、CCL2 和 CCL20mRNA和蛋白表达(P<0.01)。HB0D可以抑制上述促炎细胞因子mRNA和蛋白表达水平(P<0.01或P<0.05)。作为主要成分,APS、PNS和PE能部分或全部抑制这些促炎细胞因子mRNA和蛋白表达水平(P<0.01)。且PE对CCL20表达有很强的抑制作用,其抗炎作用更广泛。我们的研究结果表明,HB0D及其主要成分可能通过部分抑制由IL-17A诱导的视网膜色素上皮细胞的炎症反应来治疗AMD。结论:对IL-17A诱导的促炎细胞因子产生的抑制作用可能解释了 HB0D治疗AMD的有效机制。