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背景ADAMs家族成员属于I型跨膜蛋白,具有相似的基本结构,都含有去整合素和金属蛋白酶功能结构域,与细胞外基质的降解,细胞-细胞的黏连,细胞-基质的黏连及信号转导等多种细胞功能有关。虽然对ADAMs家族的功能已经有很多了解,但是由于其结构复杂,成员众多且组织分布具有特异性,仍需要进一步研究。目的构建去分化处理的常氏肝癌细胞(一种人源肝癌细胞)的c DNA文库,免疫筛选并克隆与分化相关的ADAMs基因,并初步研究其功能。方法1.Western blot方法检测DM(去分化培养基)处理的常氏肝癌细胞中蛋白表达的变化。2.构建DM处理的常氏肝癌细胞c DNA文库。3.用通用抗体对文库进行免疫筛选,克隆基因全长并测序分析。4.构建ARP1的原核表达载体,用SDS-PAGE和Western blot方法分析ARP1的功能。5.用蛋白水解酶复性电泳及SDS-PAGE分析大鼠的包括肝在内的17种组织器官的ADAMs的组成及蛋白图谱和蛋白水解酶谱。结果1.与未经处理的常氏肝癌细胞相比,DM处理的常氏肝癌细胞出现了30k D、50k D和105k D三种ADAMs。其中30k D和50k D ADAMs为DM所诱导。2.经检测,成功构建了DM处理的常氏肝癌细胞的c DNA文库。3.用ADAMs通用抗体对文库进行了免疫筛选和基因全长克隆,测序分析并注册了4个物种特异性的与ADAMs相关的基因。4.成功构建了ADAM相关基因1(ARP1)的原核表达载体,用活性电泳、Western blot方法分析发现,ARP1表达产物具有偏碱性蛋白水解酶活性,可降解明胶,并且可以和ADAMs通用抗体结合。5.通过分析不同组织器官的ADAMs的分布及蛋白图谱和蛋白水解酶谱,结果显示ADAMs的分布及酶活具有很大差异。结论本研究通过DM处理常氏肝癌细胞,构建c DNA文库并进行表达文库免疫筛选等方法,初步验证了DM处理可以诱导常氏肝癌细胞合成30k D和50k D ADAMs;构建的c DNA文库质量达标,可用性强;建立了切实可行的表达文库免疫筛选方法;注册了4个物种特异性的与ADAMs相关基因;构建了ADAMs相关基因1(ARP1)的原核表达载体,表达产物具有偏碱性蛋白水解酶活性,可以和ADAMs通用抗体结合。在不同组织器官中,ADAMs的分布及酶活具有很大差异。以上结果为进一步研究ADAMs及其相关基因的功能提供了重要资料。