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目的：本论文分为三部分,第一部分,通过2AAF+2/3PH法规范化建立大鼠肝卵圆细胞活化模型,同时检测肝功能指标,达到判断肝细胞受损情况及可否成功活化肝卵原细胞并初步鉴定的目的。第二部分,通过大鼠肝卵圆细胞分离培养并进行细胞诱导,同时对诱导过程中细胞表面标志检测及细胞观察,达到成功诱导肝卵圆细胞分化成为胆管上皮细胞的目的。第三部分,通过采用实时荧光定量法检测由肝卵圆细胞诱导型胆管上皮细胞不同分化时期中miRNA的时序表达水平,探讨相应miRNA在己知调控靶点中各分化时期的表达差异。从而达到研究及探讨各miRNA在胆管上皮细胞再生修复的整个过程中的作用及意义的目的。方法：第一部分,建立大鼠肝卵圆细胞活化模型,设立阴性对照模型组,分别收集20对大鼠肝卵圆细胞活化模型组及阴性假手术对照模型组的肝脏标本及血液标本。进行病理切片检测及TBIL、AST、ALT水平检测,观察大鼠肝组织,以确定大鼠肝卵圆细胞活化模型建立成功。第二部分,提取已成功建立8个大鼠肝卵圆细胞活化模型中的肝卵圆细胞、分离后进行体外培养。选取4份提取的肝卵圆细胞进行细胞因子EGF诱导,另外4分细胞作为正常对照,不加用诱导因子。分别对培养细胞进行流式细胞检测及荧光显微镜观察进行细胞鉴定。第三部分,分别提取诱导过程分化过程4个代次细胞中的每一代次细胞miRNA (mir-21、mir-214)、逆转录以及miRNA的实时荧光定量检测。结果：1.2AAF+2/3PH模型建立中通过生化检测ALT、AST及TbiL升高,证实可使残存肝细胞严重受损,符合肝卵圆细胞活化条件。2.表达OV-6抗原的肝卵圆细胞发出绿色荧光。表达CK19抗原的诱导型胆管上皮细胞发出红色荧光。随着肝卵圆细胞诱导过程的进行,CK19表达率越高,证明肝卵圆细胞向胆管上皮细胞分化程度越高,同时肝卵圆细胞OV-6细胞标志表达逐渐降低,表示细胞向其他细胞分化,各代此标志表达有差异。3.表皮生长因子(EGF)能诱导肝卵圆细胞增殖分化为类胆管上皮细胞。实验证明通过使用表皮生长因子(EGF)诱导肝卵圆细胞逐渐分化成为类胆管上皮细胞方法有效,能成功诱导成为胆管上皮细胞,并有胆管上皮细胞特有的表面标记表型。4.经过实时荧光定量检测,在肝卵圆细胞诱导分化为胆管上皮细胞过程中,不同代次、不同分化水平的细胞中的mir-214表达量水平无显著差异。各代细胞中miRNA的△CT进行q检验,α=0.05水准,(P>0.05),差异无统计学意义。证实在胆管上皮细胞分化过程中mir-214恒定表达,无水平差异调节。5.经过实时荧光定量检测,在肝卵圆细胞诱导分化为胆管上皮细胞过程中,不同代次、不同分化水平的细胞中的mir-21表达量水平分化至P5细胞与前P0、P1、P3代次细胞比较有显著差异。P5与P0、P1、P3细胞相比,α=0.05水准,(P<0.05),差异有统计学意义。证实在胆管上皮细胞分化过程中mir-21初期为恒定表达,无水平差异调节,直至细胞分化近完全后有明显上调。结论：本实验证明使用2-AAF+2/3PH法能有效的建立肝卵圆细胞活化模型,并通过两步酶消化肝碎组织成功提取肝卵圆细胞,经细胞表面标志鉴定证实通过细胞因子诱导能成功将肝脏卵圆细胞诱导成为胆管上皮细胞。最终经过实时荧光定量检测,发现在在肝卵圆细胞诱导分化为胆管上皮细胞过程中,不同代次、不同分化水平的细胞中的mir-21表达量水平分化至P5细胞与前P0、P1、P3代次细胞比较有显著差异。证实在胆管上皮细胞分化过程中mir-21初期为恒定表达,无水平差异调节,直至细胞分化近完全后有明显上调。在肝卵圆细胞诱导分化为胆管上皮细胞过程中,不同代次、不同分化水平的细胞中的mir-214表达量水平无显著差异。证实在胆管上皮细胞分化过程中mir-214恒定表达,无水平差异调节。